7.第七章免疫诊断与防治程序.ppt

第一节 免疫诊断 一、抗原与抗体的检测 1、凝集反应 2、沉淀反应 3、补体参与的反应 4、用标记抗体或抗原进行的抗原-抗体反应 二、淋巴细胞的测定 1、淋巴细胞的类别鉴定 2、淋巴细胞功能测定 三、免疫诊断方法的应用（不做要求） 1、疾病的诊断 2、免疫学监测 一、抗原与抗体的检测 抗原-抗体反应： 1、已知的特异性抗体检测未知的抗原； 2、已知的抗原检测未知的抗体。 抗原-抗体反应的特点： 1、特异性：抗原-抗体的结合是特异性结合； 2、可逆行：抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合； 3、可见性：抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象。 一、抗原与抗体的检测 ----（1）凝集反应 凝集反应(Agglutination): 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集现象。 1、直接凝集 2、间接凝集 1、直接凝集(direct agglutination) 2、间接凝集反应 (indirect agglutination): 将可溶性抗原吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体反应，出现肉眼可见的凝集现象。 载体种类 人O型红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。 聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒 2、间接凝集反应 (indirect agglutination): 2、间接凝集反应 (indirect agglutination): 不完全抗体 就是半抗体，即此抗体能与相应的抗原结合，但在一定条件下无可见的抗原抗体反应现象。 完全抗体是具有完整的Ig分子结构，经酶水解后可成片段Fab或F（ab`），而这2片段可表现不完全抗体的作用。 不完全抗体是相对于完全抗体来说的。 一、抗原与抗体的检测 ----（2）沉淀反应 3、免疫电泳 是将琼脂电泳和双向琼脂扩散结合起来，用于分析抗原组成的一种定性方法。用于血清蛋白种类分析等等。 4、免疫比浊法 一、抗原与抗体的检测 ----（3）补体参与的反应 将红细胞多次注射于动物（如将绵羊红细胞多次免疫家兔）可使之产生相应的抗体（溶血素）。 溶血素与红细胞结合，若有补体存在，则红细胞被溶解，这种现象称为溶血反应。 红细胞和溶血素被称为溶血系统，常在补体结合反应中用作测定有无补体游离存在的指示剂。 一、抗原与抗体的检测--（4）用标记抗体或抗原进行的抗原-抗体反应 用荧光素、酶或放射性核素等标记抗体或抗原，进行抗原抗体测定。 1、免疫荧光法； 2、酶免疫测定； 3、放射免疫测定法； 4、化学发光免疫分析； 5、免疫印迹法（Western Blot）. (1)免疫荧光法 ： 荧光素标记抗体或补体等，进行免疫组化测定。 检测组织切片、细胞涂片中的抗原。 常用的荧光素 ①异硫氰酸荧光素( FITC）－黄绿色荧光 ②藻红蛋白（PE）－红色荧光 (1)免疫荧光法 ： 测定方法 （1）直接法-----荧光素标记特异性抗体（荧光直接标记一抗） （2）间接法-----荧光素标记二抗，二抗再与一抗结合 2、酶免疫测定 当酶标记物与待测样品中相应的抗原或抗体相互作用时，可形成酶标记抗原抗体复合物。 利用复合物上标记的酶催化底物显色，其颜色深浅与待测样品中抗原或抗体的量相关。 灵敏度可达到ng~pg/ml水平。 常用的标记物有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。 1、酶联免疫吸附试验 (ELISA)---检测可溶性抗原或抗体 2、免疫组织化学技术---检测组织或细胞的表面抗原 2、酶免疫测定 （2）、间接法--（二抗法） 2、酶免疫测定 （3）、BAS-ELISA:生物素-亲和素系统 5、免疫印迹法（Western Blot） 第一节 免疫诊断 一、抗原与抗体的检测 1、凝集反应 2、沉淀反应 3、补体参与的反应 4、用标记抗体或抗原进行的抗原-抗体反应 二、淋巴细胞的测定 1、淋巴细胞的类别鉴定 2、淋巴细胞功能测定 三、免疫诊断方法的应用 1、疾病的诊断 2、免疫学监测 （一）、淋巴细胞的类别鉴定 (1) 外周血单个核细胞（PBMC）的分离 PBMC:主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验中最常用的细胞群，也是进行T细胞和B细胞分离纯化的重要环节。 方法：葡聚糖-泛影葡胺（淋巴细胞分离液）密度梯度离心法 （一）、淋巴细胞的分离与类型鉴定 （1）T