发酵与酶实验考试题目111.docVIP

1培养基配好后，为什么必须马上进行高压蒸汽灭菌？如不能及时灭菌，应将培养基暂时放至何处？为什么？ 答：如果不马上进行高压蒸汽灭菌的话，在配制培养基过程中落入培养基中的微生物，即我们说的杂菌就会开始利用培养基中的营养物质开始生长繁殖，这是我们不想要的，因为这就造成了培养基的污染。所以我们一般要在配制完培养基之后马上灭菌。暂放在冰箱里，低温保存，延缓了杂菌的生命活动。 2.在发酵罐使馆灭菌结束时，为什么在温度没有降到常温就要通入无菌气体？ 答：通常降到常温容易再次被染菌 灭菌不彻底 3.在分批发酵中，单细胞微生物的生长一般经历那四个时期？各个时期的特点有什么？其中，第一个期是什么原因造成的？ 答：延滞期、对数生长期、稳定期、衰亡期 延滞期的特点是：分裂迟缓，代谢活跃。 对数生长期的特点是：细菌数量以几何级数增加。 稳定期的特点是：新增殖的细胞数与老细胞的死亡数几乎相等。 衰亡期的特点是；活菌数按几何级数下降。 延滞期出现的原因，可能是为了重新调整代谢。当细胞接种到新的环境后，需要重新合成必需的酶类、辅酶或某些中间代谢产物，以适应新的环境而出现生长的延滞期。 4.在发酵液糖的测定中，我们配置了什么显色液，如何配制，简述配制过程？ 答：将50ml 浓硫酸缓缓加入10ml 水中冷却至室温，加入0.6g 苯酚晶体搅拌使其溶解配成显色液。 5.乙醇沉淀纯化蛋白质的原理是什么？操作过程中应该注意什么问题？据你所知还有其他粗分离蛋白质的方法吗？ 答：1、有机溶剂能降低溶液的介电常数，增加蛋白质分子上不同电荷的引力，使蛋白质溶解度下降；?2、有机溶剂与水作用，能破坏蛋白质的水化膜，使蛋白质的溶解度下降。此法分辨力比盐析高，但蛋白质较易变性，应在低温下进行。盐析法、等电点沉淀法 6.简要说明本实验固定化蔗糖酶原理和步骤？ 答：原理：通过物理或化学的方法，将水溶性的酶与水不溶性载体结合，使酶固定在载体上，并在一定的空间范1.壳聚糖载体的制备及戊二醛的偶联 （1）称取3 g壳聚糖溶于98 mL蒸馏水中，搅拌均匀，再滴加2 mL冰醋酸，搅拌至均匀的粘稠状。 （2）称取8 g NaOH置大烧杯中，加入180 mL蒸馏水及20 mL甲醇。 （3）将拔出推塞的注射器架在铁架台上，倒入粘稠状的壳聚糖溶液，使壳聚糖溶液从20 cm高的注射器出口滴入大烧杯中，以制备壳聚糖微球载体。 （4）壳聚糖溶液滴加完毕后，静止片刻，待微球完全沉入烧杯底部时，反复水洗多次至pH值中性，沥干水分。加入1%戊二醛溶液100 mL，静置2 h，使戊二醛偶联于壳聚糖载体上。 2.固定化酶的制备 （1）将静置2 h后的壳聚糖微球载体中的戊二醛溶液倒掉，再用蒸馏水洗涤5次，以除去多余的戊二醛。 （2）将实验一纯化得到的酵母蔗糖酶酶液1 mL用蒸馏水稀释至100 mL,与偶联戊二醛的壳聚糖载体混合，静置偶联过夜。围内进行催化反应的酶称为固定化酶。 7.人们进行酶的化学修饰的一般目的是什么？本实验的化学修饰剂对蔗糖酶的修饰作用呈现什么样的效果？从实验结果你能得出什么样的结论？ 答：目的：1.研究酶的结构与功能的关系。2.认为改变天然酶的某些性质，扩大酶的应用范围。①提高酶的生物活性②增强酶的稳定性③消除抗原性④产生新的催化能力 N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）能特异地修饰蛋白质分子中色氨酸残基的吲哚基团，使吲哚基氧化成羟吲哚衍生物，从而改变吲哚基的化学性质。若色氨酸残基是酶活性中心的必需基团，那么经NBS修饰后，酶活性丧失的程度与修饰剂的浓度有化学计量关系，且在底物存在的情况下，修饰剂NBS不影响酶的活力。 不同浓度的NBS对酵母蔗糖酶活力影响不同。 8.你认为该如何评价一种固定化酶的效果？ 分别测游离酶、固定化酶以及残留酶液的酶活力 活力回收= EQ \F(固定化酶总活力数,溶液酶总活力数) ×100%、相对活力= EQ \F(固定化酶总活力数,溶液酶总活力数-残留酶活力数) ×100% 9.进行温度对酶活性影响测定时，操作上有什么要注意的？ 答：顺序为：底物、控制温度、酶，低温不会导致酶失活，只是酶活性极低甚至可以为零，但温度升高仍可复性，也就是说一旦先加酶，后加常温的底物，在低温下的酶在常温的底物作用下就可以复性，仍可催化淀粉水解。 10.酶学性质研究一般要做哪些相关参数的测定？ 答：酶活力的测定、酶比活力、酶活回收率、酶比活力提高比也就是纯化倍 11.回收率和纯化倍数怎样计算得到？ 答：总活力的回收率＝纯化后总活力/纯化前总活力*100%。 纯化倍数=酶制剂的比活力/抽提液的比活力 12.假设测定酶活时得到的吸光值大于1，将如何改进实验，使得到可信的吸??值？ 答：稀释溶液，再测吸光值 13.实验中，如何测定蔗糖酶活力？蔗糖酶活力单位如何定义？ 答： 在