长期毒性.docVIP

二、 动 物 本试验选用两种 动物大鼠和狗,均购自锦州医学院实验动物中心 。经过一周 检疫和适应 ,选择 一般状况 良好的动物用于试验 。分组时称量体重 ,雄性 大鼠重1 2 2.7 士 2 9.5 g,雌性 大鼠重 13 6.8 土 2 6.7 g ;雄 狗重1 0.8 土 2.7 k g,雌狗重9.9 士 2.6kg。 试 验 方 法 1.分 组 鉴于急性毒性试验的给药量超过了限度试验的剂量(小白鼠注射给药超过0.2 g/100 k g), 可考虑只设一个剂量组。另外,文献报告一次静脉给药的最大容量 ,大鼠和狗分别为0.l m l/10g 和20 m l / 只 因此 ,本试验确定设二个剂量组:低剂量相当于上述最大容量 (大鼠为10m l / k g,狗为l.7 m l / k g),高剂量则根据予试验的结果再扩大5、7倍 (大鼠为4 5 m l/ k g,狗为1 3 m l / k g)。为了比较,同时设生理盐水对照组 (大鼠一次静注 4 5m l / k g,狗为13 m 】 / kg )。分组时将雌雄 大鼠和狗按体重分层 ,再随机分配。大鼠每组雌雄各 1 0 只,狗为各2只。 2 给药方法 连续2 8 天,每天一次 ,按规定剂量给动物静注复方甘油注射液。注射 速 度 1 5 ~ 2 0m l /m i n。注射部位,大鼠取尾静脉,狗取后肢小隐静脉。 3 观察与检查 3.1 一般症状观察、体重和进食量测定每天午前、午后 两次仔细观察动物的外形、活 动有无异常。每周一次测定动物体重和进食量。 3.2血液学及血液生化检查 试验开始前一天及连续.给 药 1 4、2 8天后,各对动物进行一次检查.血液 学 指 标为:红细胞 计数 、血红蛋 白、白细胞 总数及分类 、血小板 计数 。血液 生化指标有:谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、尿素氮及血清钠。采血方法 ,大鼠,头两次以钳取眼球法 ,末次以断头法取血 ,狗则三次都是从 后肢小隐静脉取血。每次采血前须让动物断绝饮食 8 小时 ,目的减轻药物对血液稀释的影响。 3.3 心 电图检查 试验前后给每只狗各做一次心 电图 ( l导联 ) 检查 。由于狗的心 电图所受影响因素较多 ,个体 间变异很大,而 同一只狗在不同时间却变化较小的特点,故 以 同一狗前后 自身对照为基础 ,判断雌雄狗不 同组别的心 电图波形变化之大小 。 3.4 病理学检查 试验 期终了,将所有狗及被抽检的大鼠(每组取雌雄大鼠各4只 )以放血法快速处死。随即解剖 ,首先肉眼观察殉和大鼠各种内脏器 官有无异常,继而摘 出并称量不同性别 、不同组别动物的心 、肝 、脾、肺 、肾、脑的湿重 ,依据解剖当 日的动物体 重 计算各种脏器的相对重 量一脏器系数(g 100g B.W.)。最后 ,将上述器官连同 胃和小隐静脉等一并施行 1 0 肠福尔马林 固定 ,石腊包埋,H E 染色 ,光学显微镜观察。 试验结果与讨论 1 一般症状 试验过程中,大鼠或纯的不同组别间, 其外形 和活动,如眼、耳、鼻 、皮肤、粘膜、呼吸 、进食、大小 便、姿势等未见有明显差别。低 剂量组雌鼠中,在第二次钳取 眼球后有一只于翌 日死亡,可能是失血过多引起的 2. 体重与进食量 曾先后 四次测定雌雄大 鼠或狗的不同组别的平均体重和进食量,结果发现同种属 、同性别、不同组别 间的体重增 长大致相同 ,狗呈体重增长抑制倾向,而大鼠的体重则呈负增长 导致 后一现象的原因 ,可能来 自大鼠眼部创伤和擒捉注射的机械刺激及精神刺激。大鼠和狗的进食量伴随着 体 重 增 加略有所增 ,各组的变化幅度呈平行趋势(见表l)。 3.血液学及血液生化检查 试验前及连续用药1 4、2 8天之后 ,各 检查一次。无论大鼠或拘,其不同性别,组别之 间,所列各项血液学及血液生化指标均无明显差别 (见表2、5 )。 4.心电图检查 分析每只狗于试验前后做的 两份电图,可以认为,无论雌雄 ,其不同组别间的 P 一R 间期 、Q一T 间期 以及R波振幅的改变均未超过动物 自发性变化的范围(见表6 ). 5.病理学检查 经系统解剖 ,对大鼠或狗的不同组别进行肉眼观察 ,结果均未发现具有毒理学意义的改变 .各组大鼠或狗,包括生理盐水对照组,心 、肝、肾、肺 等器官的相对重量增大,估计是 由动物体重增 长抑制所带来的继发性改变 (见表7 )。对上述动物的心 、肝、脾、肺 、肾、脑、胃及小隐静脉进行病理组织学检查 ,结果亦未见明显病理性改变。 综上所述 ,在本试验条件下,复方甘油注射液未能 引起狗和大鼠出现明显的机能性改变 ,以及特异性靶器官、靶细胞的损害。故可认为复方甘油注射液对狗和大鼠的最大无作用量分别超过 1 3 m l/ k g 和4 5 m l / k g。 根据试验结果推论,如果成人每天一次