第七章高效液相色谱法概述.ppt

当分离萘、硝基萘时，主要是极性作用力，乙 腈强于甲醇； 分离酚类物质时，主要是氢键作用力，甲醇强 于乙腈。 溶质的强度：由δ支配 溶剂的选择性：由δd，δ 0， δ a， δ h决定 混合溶剂的δ， δd， δ 0， δ a， δ h是组成混合 溶剂的各种纯溶剂相应的δ的平均值。 在保证1? K? ?10的前提下（ ? 在一定范围内），通过选择?d、 ?o、 ?a、 ?h不同的试剂来改善分离选择性 ② 溶剂极性参数P’ 溶剂极性参数是溶剂极性的另一尺度，是Sngder使 用Rohrschneider的溶解度参数数据推导出的。 P’＝log（Kg’’）乙醇+log(Kg’’)二氧六环+log(Kg’’）硝基甲苯 式中： Kg’’－与溶剂的汽化自由能成正比的极性分布系数 P’由乙醇、二氧六环、硝基甲苯分别作溶质时的溶解度数据计算得到。每种溶质的Kg’’值与P’的比值称为选择性参数。 Sngder规定的选择性参数为： P’增大，溶剂极性增加 正相色谱：P’增大，溶剂强度增加，样品K’减小 反相色谱：P’增大，溶剂强度减少，样品K’增大 例：反相色谱中，流动相从30％（V/V）甲醇－水 改变为40％（V/V）甲醇－水，问组分的调整保留值 改变多少？（已知甲醇的p’值为5.1，水的p’值为10.2） ③ 溶剂的选择 Sngder以等边三角形的三条边代表xe,xd,xn 三个参数。按每种溶剂的xi值在三角形内找到 相应的点，发现选择性相似的溶剂集中在一个小 区域（圆圈）内，将各个圆圈的溶剂归成一组， 共分成八组。 如果溶剂－样品的主要作用力变化, 则溶剂的选择性有明显的变化. 溶剂分类 I 脂肪族醚、三级烷胺 II 脂肪醇 III 四氢呋喃、吡啶、二甲基甲酰胺、二甲亚砜 IV 乙二醇、乙酸、甲酰胺 V 二氯甲烷、1,2-二氯乙烷, VI 乙腈、乙酸乙酯、二氧六环, 脂肪族酮 VII 苯、甲苯、二甲苯、硝基甲烷、硝基乙烷、甲乙酮 VIII 氯仿、水 同一组内的溶剂有相似的选择性，但极性 可能相差很大。 不同组间极性相似的溶剂，选择性可能相差 很大。 例： P’ Xe Xd Xn 选择性 甲醇 5.1 0.48 0.22 0.31 Ⅱ 丙酮 5.1 0.35 0.23 0.42 Ⅵ 甲醇：质子受体 丙酮：偶极作用力 寻找最佳溶剂的方法： ① 选择合适的p’值，使k’在最佳范围。 ② 考虑溶剂的选择性 例：正相色谱分离某一样品，以20％（V/V） 氯仿－己烷作流动相，溶剂强度合适，但分离情况 不佳。 改变溶剂的选择性，必须使选择性组的位置 有较大的变化。 氯仿属Ⅷ组，距离较远的有Ⅰ，Ⅴ组。 若以Ⅴ组的二氯甲烷代替氯仿，混合溶剂 的极性应维持不变。 即： （3）离子交换色谱流动相 大多数离子交换色谱以盐类的缓冲溶液 为流动相，某些特殊的情况下也加入有机溶 剂。 在离子交换色谱中，交换反应可表示如下： 当溶液中有多种离子同时存在时，不同离子 对树脂可交换的基团进行竞争，即发生不同离子 间的交换反应： 影响溶质 k’值的因素： ① pH的影响 离子交换分离的对象是一些可电离的化合物。 流动相的pH值影响样品的电离，从而影响样品 的保留值。 对于弱酸组分，采用阴离子树脂作为固定相。 在阳离子树脂上： pH值是通过影响溶质中可交换离子的浓度 来影响k’值。 所以pH值对弱酸、弱碱样品影响大，对强 酸、强碱样品影响小。 ② 溶剂离子强度的影响 缓冲溶液或其它盐的浓度增大，溶剂离子 强度增大，对交换剂上的离子基R-或R+竞争力 增强，样品离子的竞争力下降，保留值下降。 因为样品中阳离子的量极少（树脂总 容量的2％），树脂上吸附的主要是洗脱 剂的阳离子。 ③ 不同离子的影响 缓冲溶液离子类型不同，与树脂的亲和力 不同，洗脱能力不同。 例：阳离子与树脂的亲和力顺序： K+NH4+Na+H+, 阴离子与树脂的亲和力顺序： 柠檬酸根SO42-C2O42- 洗脱能力：钾盐缓冲溶液比钠盐缓冲能力快 （4） 分子排阻色谱的流动相 不能借助改变流动相来改善分离。 流动相的选择主要考虑： ① 能够很好溶解样品和有低的粘度 ②