双荧光素酶染色质免疫共沉淀.pptxVIP

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2016-12-01 发布于湖北
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双荧光素酶染色质免疫共沉淀.pptx

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双荧光素酶染色质免疫共沉淀;检测原理;应用原理;查找靶基因启动子序列;技术流程;CHIP简介;CHIP原理;技术示意图;1、甲醛交联细胞;2、染色质超声断裂;3、免疫沉淀蛋白和DNA复合物;4、收获免疫复合物（抗体-蛋白质-DNA）;5、洗脱免疫复合物;6、去除甲醛交联;8、染色质免疫共沉淀DNA的分析和蛋白质在DNA上结合位点的鉴定;优缺点;注意事项;2、交联的条件交联所用的甲醛终浓度约为1%，而交联时间需要预实验来确定。通常的交联条件为室温10min。甲醛的交联反应可被加入的甘氨酸终止。交联时间如果过长，细胞染色质难以用超声波破碎，影响ChIP结果。交联时间如果过短，则交联不完全，产生假阴性。;3、超声片段的大小打断后的染色质片段200-600bp的片段（用琼脂糖凝胶电泳检测），以便暴露目标蛋白，利于抗体识别。超声波是使用机械力断裂染色质，容易引起升温或产生泡沫，这都会引起蛋白质变性，进而影响ChIP的效率。所以在超声波断裂染色质时，要在冰上进行，且要设计时断时续的超声程序，保证低温。另外，超声探头要尽量深入管中，但不接触管底或侧壁，以免产生泡沫。总超声时间也不要太长，以免蛋白降解。 ;THANK YOU!