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《细胞生物学》实验 教学大纲 （执笔人： 张利平 审核人： 教学院长： ） 课程简介 （一）课程代码： （二）课程名称：《细胞生物学》实验 ( Experiment of Cell Biology ) （三）修读对象：生物科学及生物技术专业本科生 （四）总学时与学分：27学时/3学分 （五）考核方式：随堂测试 （六）相关课程：医学细胞生物学、普通生物学、医学遗传学 （七）内容提要： 这本实验教材是为高等医学院校细胞生物学实验教学编写的，适用于四年制生物科学及生物技术专业学生。细胞生物学实验课的教学目的，主要是通过基本技能训练以及观察分析实验结果，使学生了解并掌握有关的实验技术原理和操作方法，进而培养学生动手实践、观察分析和解决问题的能力。为达到此目的，实验内容自成体系，着眼于加强学生的基本技能训练，以及观察分析问题和科学思维能力的培养。大多数实验采用生活细胞材料，由学生自己动手取材和实验，使学生能对细胞获得生动的认识。选编了一些生物医学常用的细胞生物学基本实验，如细胞的显微观察、细胞计数、细胞组分的分级分离、细胞组分的化学反应、细胞生理活动、细胞培养、细胞融合等，为后续的课程及医学研究打下一定基础。 二、教学目的和教学方法： 培养学生基本的细胞生物学实验方法并培养学生的实际动手操作能力，帮助学生形成基础实验研究思路，为后续的学习和实验研究打下基础。 全书内容共5个实验，针对各专业学生教学根据具体情况采用学生动手操作为主，部分操作教师演示示教为辅的方式结合进行。 三、教学学时分配 总学时27，各实验学时分配如下： 实验一：鸡血细胞的融合实验 6学时 实验二：细胞器的分级分离 6学时 实验三：微丝染色及形态学观察 5学时 实验四：细胞中碱性蛋白的显示 5学时 实验五：红细胞膜的通透性 5学时 四、选用教材和主要教学参考书 教材：《细胞生物学》 翟中和主编 高等教育出版社出版 教学参考书： 分子细胞生物学 韩贻仁 科学出版社 细胞生物学 王德耀 上海科学技术出版社 细胞生物学研究方法与技术(第二版) 刘鼎新 北医、协和医大联合出版社 细胞生物学实验(第二版) 杨汉民 高等教育出版社1997年07月出版 Molecular Biology of the Cell 4th Edition, Bruce Alberts et al. Molecular Cell Biology 4th Edition, Harvey Lodish et al.  目录 实验一 鸡血细胞的融合实验…………………………………………………………………5 实验二 细胞器的分级分离……………………………………………………………………6 实验三 微丝染色及形态学观察 ……………………………………………………………7 实验四 细胞中碱性蛋白的显示………………………………………………………………9 实验五 红细胞膜的通透性……………………………………………………………………10  实验一 鸡血细胞融合实验 【教学目的】 1.掌握细胞融合的概念及基本原理。 2.初步掌握PEG诱导细胞融合技术。 3.了解细胞融合技术的生物学和医学意义。 【教学方法】 幻灯片演示讲解结合板书讲解，配合具体实验操作演示。 【教学学时分配】 实验前讲解 30min 实验操作 120min 实验后总结及实验用品整理 30min 【教学内容】 1.实验原理……5min PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子量的多聚体。PEG可与水分子借氢键结合，在高浓度(50％)的PEG溶液中自由水消失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞融合。为了发挥PEG促进细胞融合的效力，必须采用较高浓度的PEG溶液，但在高浓度PEG溶液下，细胞可能因脱水而受到显著的破坏。因此，选择合适的分子量、浓度及作用时间是PEG融合技术的关键。鸡血的采集与抗凝50％PEG溶液的配制细胞融合操作：离心洗涤沉淀加GKN 39度水浴5min滴加PEG浴15min加入GKN水浴10min离心弃上清结果观察：加GKN混匀取1滴悬液滴片，加Janus green染液8 min后盖片观察。 在显微镜下观察细胞融合情况，可看到不同融合状态的细胞。发生融合的细胞核总数/视野内所有细胞核总数 1.滴加50％PEG时，应缓慢、逐滴加入，而且每加一滴应轻摇离心管以混匀，滴加完毕后可用滴管温和混匀。 2.高Ca2+浓度能提高细胞的融合率。 3.因PEG对细胞有毒性，应严格控制作用时间于1～2 min，但本实验中融合后的细胞不继续培养，可将处理时间延长