第八章液相色谱的色谱柱和流动相.ppt.pptVIP

第一节 高效液相色谱的色谱柱 第二节 高效液相色谱的流动相 第三节 超高效液相色谱和制备色谱 第八章 液相色谱的色谱柱和流动相 第二节 高效液相色谱的流动相 一、液相色谱流动相 1、常用反相色谱流动相：甲醇-水、乙腈-水 2、常用正相色谱流动相：正己烷-异丙醇、正己烷-乙醇、正己烷-四氢呋喃 3、常用离子色谱流动相：稀硝酸、稀氢氧化钠 4、需要考虑流动相自身中紫外检测波长下的吸收强弱，溶剂紫外截止波长见表9-4。 二、高效液相色谱方法的选择 1、反相色谱可以分析多数样品。 2、极性极强的水溶性样品在反相色谱中保留很弱，难以有效分离，可以用正相色谱（氨基柱、二醇基柱）有机溶剂-水流动相分离。 3、弱酸、弱碱样品抑制电离，反相分离。 4、分析离子，首选离子色谱。 5、生物分子的分离模式有反相、离子交换、体积排阻、疏水作用、亲和色谱模式。 三、色谱条件的影响 1、色谱柱影响分离度，越长分离度越大，内径越小分离度越高。 2、柱填料影响分离度，颗粒越小柱效越高，分离度越大，但柱压越高（5μm到3μm柱效提高30%柱压却升高1倍）。 3、流动相影响保留，洗脱能力越强，分析时间越短，如：反相色谱流动相中有机组分增加保留减弱。 4、流速越高，保留时间越短，但柱压液越高。 5、柱温越高，保留时间越短，分离度有所降低。 6、在等度洗脱难以获得短的分析时间和满意色谱峰形时，可以进行梯度洗脱。 40度 169bar 90度 94bar 温度的影响 SB-C8 4.6X75mm 3.5um 流通池: 5mm, 2.5uL 20~60%B (10min.) 2mL/min. SB-C8 4.6X150mm 5um 流通池: 10mm, 8uL 20~60%B (30min.) 1mL/min. 填料粒径的影响 5um 色谱柱尺寸: 4.6 x 50mm 3.5um 色谱柱尺寸: 4.6 x 50mm 填料粒径的影响 -CN柱 -苯基柱 C8柱 填料种类的影响 第一节 高效液相色谱的色谱柱 第二节 高效液相色谱的流动相 第三节 超高效液相色谱和制备色谱 第八章 液相色谱的色谱柱和流动相 超高效液相色谱（UPLC） UPLC和快速液相色谱 超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC）是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC（高效液相色法）的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域，作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLCTM 超高效液相色谱系统在1996年问世，之后像安捷伦、岛津等公司也陆续开始生产超高效色谱仪。目前，超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。 仪器方面代表性的是2004年Waters公司推出Aquity 超高效液相色谱(UPLC)，Agilent公司 从2006年相继推出Agilent 1200、1260、1290具有更高耐压限和灵活性的高分离度快速液相色谱系统（RRLC）。 色谱柱方面在市场上出现了不同规格、不同品牌的亚2μm（1.7μm）的色谱柱，及性能和工作范围各不相同的超高效液相色谱产品。 Agilent 1290 液相色谱系统 使用亚2微米粒径的色谱柱，用Agilent 1200系列高分离度快速液相色谱（RRLC）系统进行快速和超快速分析 UPLC的原理与HPLC相同，所改变的地方主要有以下几点： 小颗粒、高性能微粒固定相的出现。 HPLC色谱柱，例如常见的十八烷基硅胶键合柱，它的粒径是5um，而UPLC的色谱柱，会达到3.5um，甚至1.7um，具有更高柱效，更加利于物质分离。 超高压输液泵的使用。 由于使用的色谱柱粒径减小，使用时所产生的压力也自然成倍增大。故液相色谱的输液泵也相应改变成超高压的输液泵。 高速采样速度的灵敏检测器。 与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本。 UPLC比HPLC更为优越，主要表现为更高效的分离效率，即分析时间更短和分离度更大。 制备色谱 制备色谱是能够获得一定量（从几毫克到千克甚至吨级）纯品的色谱分离方法。 制备色谱在医药工业（如外消旋体药物分子的分离），生化技术（生物制品的纯化和植物化学组分的纯化），精细化学品的生产方面已成为越来越重要的制备分离手段。很多高纯标样只能用制备色谱获得。 为了满足生物、中药等复杂体系分离纯化的任务，制备色谱越发发挥出其作用。 制备型液相色谱技术可以简单的认为是分析型液相色谱技术的放大，一是输液泵有高的流量，