高效液相色谱分析报告.pptVIP

Ch.3 High Performance Liquid Chromatography第3章 高效液相色谱分析 第一节 经典液相色谱法 第二节 平面色谱法 第三节 高效液相色谱法概述 第四节 高效液相色谱仪 第五节 高效液相色谱法的各种模式 第六节 影响色谱峰展宽的因素 第七节 色谱新技术 第一节 经典液相色谱法 §1 吸附色谱法 §2 分配色谱法 §3 离子交换色谱法 §4 凝胶色谱法 一、基本原理 吸附剂表面布满吸附能力不等的活性中心，试样中的各组成被吸附剂吸附的强弱不同， 产生差速迁移而实现分离。 竞争吸附 Ｘ + nＳ吸附 ≈ Ｘ吸附 ＋ nＳ 吸附平衡常数Ｋ＝ Ｋ值越大，越易被吸附，保留值大，难洗脱。反之则相反。 吸附规律可用吸附等温线来描述。 二、固定相－吸附剂 三、流动相 1、基本要求： ①与吸附剂、试样不发生不可逆的化学反应； ②具有合适的极性与良好的选择性； ③纯度合格; ④粘度适中; ⑤有一定挥发性。 一、基本原理 组分进柱后，在两相间溶解度不同而进行分配，各组分Ｋ值不等，保留值不等，得以分离。 二、固定相 三、流动相 可以是各种溶剂， 必须不与固定相互溶， 组分在两相间的溶解度均需足够高， 流动相对样品组分的溶解度相对小些，固定液对样品组分的溶解度相对大些，否则组分在柱上很快洗脱而不能分离。 四、操作方式 ★反相分配色谱应用较广 ∵流动相价廉且易获得，易提纯。 五、特点 一、基本原理 Ca2＋ + 2Na＋ = 2Na＋ + Ca2＋I2 阳离子交换树脂 活性基团如：-SO3H、-COOH（强酸性、弱酸性） RSO3-H＋ + Na＋ + Cl- = RSO3-Na＋ + H＋+Cl- 阴离子交换树脂 活性基团如：季胺基－NR3＋(强碱性)、 －NH2、－NHR(弱碱性)等。 R-N(CH3)3＋Cl- + OH- = R-N(CH3)3＋ OH- + Cl- 二、固定相 离子交换树脂，由苯乙烯和二乙烯基苯交联共聚。 二乙烯基苯称为交联剂。 1、交联度：树脂中交联剂的含量。 2、交换容量： 理论容量：每克干树脂含离子交换基团的物质的量。 实际容量：每克干树脂真正参加交换反应的基团的物质的量。 三、流动相 1.PH值 2.缓冲液的类型 3.离子强度 4.有机溶剂 再生 一、定义 以凝胶为固定相的色谱分析方法。 凝胶：多孔性填料，高分子聚合物 ①含水量： 高—适用于水溶性试样 相似相溶 低—适用于非水溶性试样 ②交联程度： 高—孔径小—适用于小分子分离体系 低—孔径大—适用于大分子分离体系 二、分类 按流动相分类 三、分离原理： 固定相凝胶表面有许多孔穴; 小分子进入孔穴很深，难于洗脱； 大分子进入孔穴很浅，易于洗脱; 洗脱难易不等，实现分离。 空间排斥理论 两条假设: ①孔内外同等大小的溶质分子处于扩散平衡状态，平衡时分配系数K=[Xs]/[Xm] ②K的大小，只由溶质分子的尺寸及凝胶孔隙的大小所决定. 推论： ①分子大，不能进入任何孔隙，则[Xs]=0 K=0 ②分子小，能进入任何孔隙，则[Xs]=[Xm] K=1 ③尺寸在上述两种分子间时，0K1 各组份Ｋ值不同，最终可以实现分离。 四、优点： 方法的特殊性： 组分分子与固定相间没有任何作用力，只是根据分子体积大小来分离混合组分。 ①可用于分析化学活性物质； ②可分级制备一定分子量范围的高分子化合物; ③可以根据保留值求算分子量。 Achilles’ heel 第二节 平面色谱法 一、基本原理 吸附色谱原理 二、固定相和流动相 1、固定相 2、流动相 Stahl模型 三、操作技术 1、薄层板的制备 ①软板的制备 ②硬板的制备 I、倾注法 II、刮板法 III、机械涂铺法 ③烧结玻璃板 §２ 纸色谱法 分配色谱: 载体:纸 固定液:吸附于纸上的水 流动相:不与水混溶的有机溶剂 滤纸的选择: ①质地均匀 ②平整无折痕 ③保证展开剂匀速前进 ④有一定机械强度,松紧适宜 ⑤含杂质少，无明显的荧光斑点 §1 历史 LC柱效低， GC不适用：高分子量、热稳定性差、极性强， HPLC的问题：固定相的制备