木霉菌产生厚垣孢子相关基因的筛选和克隆.pdfVIP

摘 要 木霉菌是一种具有重要经济价值的丝状真菌，是一类分布广泛的土壤习居菌，被认为是最有 希望的生防冈子。据统计，在全世界25个国家和美国43个卅I的生物防治课题中，大约34％是有 关木霉的研究，可见木霉菌在生物防治上具有独特优势和研究价值。它的特点是对于生长环境具 有广泛的适应性，韧利用各种简单或复杂的碳源和氮源，木霉可产生多样的拮抗作用，产生抗生 物质和溶菌酶类。目前利用术霉作为植物病害的生防真菌已有很多的报道，但将水霉作为生物农 药直接用于生产，茁剂的保质期还存在一定的问题。生物制剂要求有一定的保质期，而影响菌剂 保质期的主要因素是菌体类型。木霉制剂有两种类型，一种利用分生孢子另一种利用厚垣孢子。 分生孢子产量大，但存活期短，而厚垣孢子存活时间长，保质期长，因此厚垣孢子制剂有其独特 的优势。目前对于厚垣孢子的研究多在丁孢子的培养条件，对于厚垣孢子形成的分子机制还知之 甚少。为了研究这一问题，我们利用RNA指纹技术cDNA。AFLP(cDNA—ampl谕edfhgⅡlemlengtll polym叩hism)分析了绿色木霉在特异产厚垣孢子的培养基中产生厚垣孢子和不产生厚垣孢子时基 I、TriⅡ、THⅢ、 B10t进一步筛选出了五个刚性克隆。Nonll锄B10t结果显示，其中五个片段(Tri 强Ⅳ、TriV)都呈阳性反应，TriI和TriII在不产生厚垣孢子的时候表达量很少，但在产生厚垣 孢子时表达量咀显增加。THⅢ、1HⅣ和TriV在不产生厚垣孢子时没有表达，而在产生厚垣孢子 的时候有明显表达．证明这五个片段与产生厚垣孢子有关。为进一步弄清这五条片段的结构，我 们对它们进行了克隆和测序分析，TIi I与哈氏木霉60s核糖体(P36)基因具有较高的同源性， 转录因子cph2具有较高同源性，删Ⅳ和T|iV与已知基因同源性很低，可能代表新基因。 关键词： 木霉菌，mRNA差异显示，cDNA-AFLP，Nonllem blot，克隆 Abstract is 州c^od￡，mdisan in山e con()1of and importantgroup bi0109ical fungi phy泖athogenic inthe haveexceUent andcancon∞lt11e ubiquitousenvjronⅡ圮nt．They adaptabimy phytopathogene mediversifiedmechanisms alldcell through includiⅡg ofthebioIcontrolTesearchesafe曲out什ichD出胤n． lysis．AccoTding协st撕鲥cs，thifty—fourpelceDts So刚曲D出堋柚as and valuesinthefield u11iqueadv觚tagesstudy ofbio-contr01． Now mat丁m矗D如删callbeusedasamethod control many reporcsprove ofbiologicalagainst orconidi