实验三-离心技术及其物质代谢实验-xuxia.pptVIP

实验内容 离心技术 邻甲苯胺法测血糖含量 糖酵解中间产物磷酸丙糖的鉴定 酶法测定血浆胆固醇（下午） 二、胰岛素对血糖含量的影响及测定 实验目的： 通过实验方法证实胰岛素对血糖含量的降低作用，即检测家兔注射胰岛素前后血糖浓度的改变. 掌握邻甲苯胺法测定血糖浓度。 实验原理： 1.胰岛素降血糖的机理： 1)促进肌肉、脂肪组织对葡萄糖的通透性，促进葡萄糖进入这些细胞； 2)糖原合成↑,糖原分解↓； 3)糖有氧氧化↑； 4)磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶合成↓→糖异生↓； 5)激素敏感性脂肪酶↓→脂肪动员↓。 2.血糖含量的测定： 1.??1）取试管四支，按下表操作　 2）混匀，置沸水浴中加热10分钟，取出立即置冷水中冷却． 3）用630nm波长，以空白管校正吸光度为0，分别测定各管吸光度值． 4）计算： 目前国内医院多采用葡萄糖氧化酶法和邻甲苯胺法测定血糖。 注意问题 胆固醇含量测定：4个组做空白和标准管，样品管每个组都做。测吸光度值时把空白管和标准管放入分光光度计，只换样品液即可。 宝山壁画 宝山壁画是引人注目的昂贵文物。此壁画发现于阿鲁科尔沁旗东沙布乡境内。1994年列为“全国十大考古新发现”之一。宝山壁画中最引人注目的是《杨贵妃教鹦鹉图》。该画高0.7米、宽2.3米，用于笔重彩绘制，最突出的表现了 晚唐风格。唐代擅长绘贵妇仕女的大师周昉绘制了《杨贵妃教鹦鹉图》，不仅享誉中原，而且还影响全国各地。发现于阿旗宝山古墓里的这幅画，就是契丹人聘请中原画家按照周氏风格绘制的， 技法深得周氏画风的真传。在唐人真迹稀如星风的今天，能够从中完整了解唐代人物画的杰出成就，堪称美术史研究的辛事。这幅壁画现今保存在阿鲁科尔沁旗博物馆，历经千年，恍如新绘，是该馆的镇馆之宝。 欢迎大家观看！ 实验注意事项： 试管、移液管洗干净； 加入的试剂正确； 混匀； 成腙反应前，溶液必须先碱化并在室温放置10min，目的是使磷酸丙糖中的磷酸基水解脱去，生成的颜色比较稳定。 血清胆固醇测定（酶法） 【实验目的】 1.了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇的原理。 2.掌握血清胆固醇测定的临床意义。 血清中总胆固醇包括胆固醇酯(CE, 70%)和游离型胆固醇(FC, 30%)。胆固醇酯酶（CEH）先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶（COD）的作用下氧化生成Δ-4-胆甾烯酮和过氧化氢。后者经过氧化物酶（POD）催化与4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应，生成红色的醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比，在500 nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量。反应式如下： 【实验原理】 1.标本：不溶血的血清或血浆标本。血浆用肝素钠、 EDTA抗凝，不可用草酸盐、氟化物。 2.取试管3支，编号，按下表操作。 【实验方法】 加入物（ul） 测定管 标准管 空白管 血清 10 - - 胆固醇标准液 - 10 - 蒸馏水 - - 10 酶应用液 1000 1000 1000 3.混匀后，37℃水浴保温15分钟，在500 nm波长处比 色，以空白管调零，读取各管吸光度。 【计算】 A标本 CHO（mmol/L）= ———— × 标准液浓度 A标准 【标准液】 胆固醇 5.17 mmol/L（200mg/dL） 【正常参考范围】 3.10～5.70mmol/L * * * * * * * * * * * * 特别是在生物化学和分子生物学研究领域，，每个生物化学和分子生物学实验室都要配置各种类型的离心机 细胞器、生物大分子的沉淀等 实验三 离心技术及物质代谢实验 徐清清 定义：离心技术（Centrifuge technology）是利用物体高速旋转时产生强大的离心力，使置于旋转体中的悬浮颗粒发生沉降或漂浮，从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离之目的。 用途：离心是蛋白质、酶、核酸及细胞亚组分分离的最常用的方法之一。 离心技术 第一节 离心技术的原理 当一个粒子在高速旋 转下会受到离心力F作用， 其大小为： 。 m：沉降粒子的有效质量 r：粒子的旋转半径，单位cm ω：粒子旋转的角速度 离心机转速的表示方法： 1.每分钟转数 Revolutions Per Minute (rpm) 2.相对离心力 Relative Centrifugal Force (RCF) RCF 表示实际离心力相当于地球引力的