睫状神经营养因对慢性高眼压鼠视功能的保护作用及Stat3信号转导途径的研究.pdfVIP

中文摘要 睫状神经营养因子对慢性高眼压鼠视功能的保护作 用及Stat3信号转导途径的研究 摘 要 目的：本实验通过建立鼠慢性高眼压模型，观察慢性高 眼压过程中睫状神经营养因子(ciliaryneuro缸opmc fact瓯CNrF)对视神经纤维和视功能的保护作用，探讨 tr觚sducer CNrF是否通过信号转导和转录激活因子3(si盟m andactivator 步研究周期素Dl(cycliIlD1)是否参与了Stat3信号转导途 径，为临床寻求青光眼视神经保护的更有效治疗方法提供实 验依据。 方法： 常对照组；②仅前房穿刺组：③未治疗组：根据造模后眼压 升高的不同时间段分为1天、2天、4天、8天、14天、28 天组，每组各3只动物，6眼；④治疗I组：在眼压升高的 第一天双眼玻璃体内注入CNTF(2肛坦鹇)，分为14天、28 天组每组各3只动物，6眼；⑤治疗II组(治疗对照组)： 同条件下双眼玻璃体内注射生理盐水(2山)，分为14天、28天 组，每组各3只动物，6眼。其中，未治疗组、治疗I组、 治疗II组均采用造模成功鼠。 2慢性高眼压动物模型的建立：用激光制造鼠慢性高眼 压模型，双眼造模。分三步：①散瞳：②用4号半针头尖端 做前房穿刺放液使前房变浅以至消失；③在前房消失后使用 中文摘要 束直接垂直于角膜面照射于角巩膜缘，每象限照射25点。 成模标准：实验期间(28天)眼压较其上升超过30％，且 未出现角膜缘新生血管及晶状体混浊。 3病理组织学观察：砸染色，在光学显微镜下观察激 光术后房角组织的病理变化。 4免疫组织化学方法检测pStat3的表达：光学显微镜 下观察，细胞胞浆呈棕黄色着色者为pStat3阳性。 5免疫组织化学方法检测视神经纤维轴突的表达：光学 显微镜下观察，视神经纤维轴突胞浆着色呈黄色或棕黄色的 阳性表达。 6免疫组织化学方法检测cycliIlD】：在光学显微镜下观 察，细胞核呈棕黄色者为阳性。 7细胞凋亡检测及定性分析：使用n腿L(te玎ninal 缸ans向髑emediatedx-dUTPnickelld deoxy姗cleotidy labeling)法测定细胞凋亡。光镜下观察，细胞核呈棕黄色 者为阳性。 8闪光视觉诱发电位(F．VEP)检测：F．Ⅵ冲潜伏期能 客观反映神经传导机能和损伤程度。观察指标为F．ⅦP的 Pl波潜伏期LPl(ms)。 结果： l眼压：本实验中鼠正常眼压的95％参考范围(17．32 删：IlHg，25．82mmHg)，激光光凝术后第2天眼压开始升高， l周左右达到高峰，眼压峰值的均值为30．83士1．72 m】nHg。 在实验结束时(28天)眼压均值为29．89土1．96mmHg。 2房角病理组织学观察：正常房角组织，可见房水引流 中文摘要 通道通畅。激光术后房角组织，房角部位可见大量细胞浸润， 成纤维细胞增生，房角闭塞，房水引流通道受阻。 3凋亡阳性细胞的定性分析：在高眼压造模后未治疗组 1、2、4天组均未发现凋亡细胞；8、14、28天组在视网膜 RGCs层及内核层可见到较多棕黄色凋亡阳性细胞。 网膜组织中仅有极少量pStat3表达，未治疗组，眼压升高l 天时其视网膜中pStat3的表达开始上升，第2天达到高峰， 第8天仅有微量表达，到第14天基本上下降到正常水平。 眼内注射咖组，视网膜中pStat3在实验14天和28天 均有表达，且其表达程度均高于同时间段的未治疗组及治疗 对照组。 5cyclillD】阳性细胞的表达情况：正常视网膜组织中几 D1 乎未见cyclillDl阳性细胞。在高眼压未治疗组，cyclin 的表达随pStat3表达的增多而增高，在高眼压第2天其表 达达到