兴安落叶松胚性伤组织诱导研究.pdf

摘要 兴安落叶松(Larix gmelinii)是我国东北地区主要的造林树种，近年来对其优良种 源的需求逐渐增大。而由于其结实量不稳定且种子具有休眠特性，难以满足目前的生产 需求。因此，本研究以成熟和未成熟合子胚为材料，系统研究了兴安落叶松胚性愈伤组 织诱导的影响因素，以期确立高效、稳定的兴安落叶松胚性细胞系，并为其体胚发生体 系的建立提供实验依据。主要结果如下： (1)以成熟合子胚为材料的诱导过程中发现，种源、培养基类型、激素种类、低温 处理以及带胚乳与否，都对兴安落叶松胚性愈伤组织的诱导产生了明显的影响。内蒙种 及带胚乳培养都有利于诱导。 (2)未成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导与外植体采集的时间关系密切。在6月中上 旬取材的外植体诱导率为0；而6月下旬～7月上旬取材的外植体(即，处于前子叶 态好，7月下旬以后随着合子胚发育逐渐成熟，胚性愈伤组织的诱导率明显下降。 (3)不同激素组合和浓度配比对胚性愈伤组织诱导率影响不同，且合子胚不同发育 时期受激素作用的程度也不相同，处于胚胎选择时期的外植体，无论激素浓度是多少， 胚性愈伤组织诱导率都是0，而前子叶期胚在l mg·L一2,4．D、0．1nag·L～BA、0．5mg·L4 入可显著提高胚性愈伤组织的诱导率。此外，当琼脂浓度为4nag·L4时，胚性愈伤组织 的诱导率最高。 (4)选择合适的继代时间对胚性愈伤组织的增殖影响也较大，当愈伤组织培养17～ 24d时，继代于琼脂浓度为5g·L-l的培养基中效果较好，时间过长可能使胚性愈伤组 织失去胚性而不能进一步生长发育。增殖阶段仍就需要一定量的激素，首次继代培养在 添加O．5 BA和O．25 KT时效果最好，增长量可以达到 mg·L～、2,4．D、O．05 mg-Ld mg·Lo 1．5g，而后激素浓度降低至原来的的十分之一。若直接转接到无激素的培养基中，外植 体将褐化死亡。 (5)成熟培养基中加入适量浓度的ABA(2 mg·Ld)，胚性愈伤组织就会分化出柱 状后期原胚。添加适量的PEG、肌醇也可以起到促进分化的作用，但是体胚的生长状态 不好，也没有分化出子叶胚；ABA和PEG合用，无明显效果。将子叶形胚转移到不含 任何激素的萌发培养基S中5～7d后，子叶由黄白色转变为绿色，且逐渐张开，下胚 轴伸长，但生根情况不好。 关键词兴安落叶松；体细胞胚发生；胚性愈伤组织；合子胚 Abstract Larix isoneofthe foresttreesinnortheastern is gmelinii important shortof seedsdueto demandanddocumentalcharacterofits good increasing wecanobtain with somatic plenteousseedlingsgoodqualitiesby this andimmature were Therefore，in used study,mature zygoticembryos(zc)ofL．gmelinii as to the induction factorswhich influencethe callus(EC)，then explants embryogenic