产植酸酶黑曲霉株s8的筛选及其植酸酶基因的扩增与鉴定.pdfVIP

摘要 本文主要报道7在PDA培养基上从37份样品巾分离、筛选到了黑曲霉菌株19 蓬酸瓣戆蓦拣7稼。选择在羧蛙条磐下(PH5．5)酶溪性较藏显较稳定瓣s8蘩株(泉 源于发酵红麓)，其酶活性在该条件下为19．90U／ml。用酚／氯仿抽提法、溶菌酶破坏菌 应的方法是经改进的泛特津(Vitagene)试剂盒法。通过引物设计软件设计、分析、 筛选掰两对弓|物，弭j另一对穗报道的弓|耪俸对照，pcR扩增结果楚设计时没有去撺 phyA基因内食予的弓l物扩增效果最好，在该弓l物的上下游分别引入了咒沏l和Xbal I酶切位点，获得的特异性PCR产物长约1．5kb。同时对PCR反应体系进彳亍了优化， (SU／u1)O。5ul，灭蓥ddH20 试剂盒法、加热溶解法和PCR RecoveryKit法进行纯化回收，结果是PCR Fmgmem Kit法罄狡产物损耗最小，操律最方便侠捷，其产量珂达到约 FragmentRecovery lOng／d。根据已报道的檀酸酶PhyA綦因序列酶切位点，对网收的目的片段进行酶切 I、Sal I、KPn 图谱分析鉴定表明，该基因能被BamH l酶切，不能被Hindlll、Xbal I酶切，与已知的phyA基因瓣切图谱基本一致，进一步判定PCR扩增产物巾含有楼 酸酶phyA基因。 美链词：攘酸酶PCR PhyA基因赘饶分辑 萼l宙 攘酸黪《蹲辨辩≥麓一鞫髓露瑟黎澈≤秘褥#acid)瓣骥酸瓣粪，翕瓣爨凌羧瓣 《穴骥黢掺§黧)终辫受搭l黪靼炎辍骥数。越熬转辫瓣燮：3一缝鼗黪骥鼗3，l，3。龄嬲岛 缀燃嚣G。3．{潼赫。壤黼簿产灞罄褒予攘耱、淤黪帮鬻整褥审，骺惹浆、枣纛舔寓 簿饕熬，艇孳努援雾蘩、鼗零稳孝}蘧，爨羧器蘩，麦麟姆蘩磐瓣援豢整橼爱黪曝、 壤箨、瀚簿簿嶷梭镦激糨审。瓣翠簿渤瀚镩幽涨惹蕊龄黼撬酸粥瓣丽健镯瓣审祷黢 辩饕蔑器袭錾爨滚滚羧纛鼗舞瓣，蔌聪遮壤骥滚滚爨、簿簿豢襄浮繁鼙壤、蕊菠蒸 髂箱瓣骶营游襁耩瀚暇羧葶|i掰髂，穗躐黼的利闱W掇商黼禽她渔产效率艇降低槛酸 骥瓣器壤懿溪絷。 糗皴蹲搏为攀鬻劫嬲姆捌料淤抛铷，其溯喂艘槊穗褥猁了广溅的确诫。织擒羧 瓣嚣辩藤鸯囊舔瓣苓广鹬爨嚣燕臻露；§、禳黧懿在栽然鞯瓣帝静爨囊熊，囊激夫黉 燮产；壅产攥露掇囊i2、蕊黻瓣蕊一熬憋掌转援笨邋予键糕瓣￡箨葵皴l致熬辩热 愁蠛警嘲瓣截靛激囊、辩溪穗黼逡≯辩滚鼙翡猕器瓣黼举穗滔激簿。黼罐滚，黼著 穗耱Z渡戆鬟爨、支霉j强绦蠹诙瓣疆建辍嫠垒浆王黎簸泰懿爨飞壤避，捷黢黎懿篓 添薹瓣辩巍进溅海鬣辨褴翡磷粥热爨。鞴粥然粼芏糕警羧掰瓣械静黼撩靛酶鬣产浅 豢蘧藤、接鼗黧鼗凄搴魏滚瑟熟褥罄簧爱翳辫愁=￡嫠羹袋莓瓣遥。 霸1907举SuzoM簿程涨糠巾教黼艇宥椭躐酶满饿的磷激酶以辩，荫关椭酸黼 戆鹱嚣黪攀拣雾攀蕊添炱，瓣舔蕊爨建，共鸯专襄夸拣被蘩黎释蒸嚣蒋瓣了势蕊霆 陵，羹嚣枣谴≯鸯测。蛾早分迦擞地燧酸粼熬鞭魁采溅予蠢、飙蝴 馨港囊辩l豁蒜峨秽搿#粼蝴渊瓣霸游蘧嚣，寝瓣爨耩濑鬻套羲{霪辩转，蒺枣啼髑～ +t47黪102bp越接蛰羧露舞爨～爨燮靛囊蘩逸禽予黪辩。冀主露冀蘩峻惫孑熬特髭 浚蓥鬻孛瓣豢衾藿遮辩68．3％，逶莛嫠袋囊蘩枣蕊轰戆爨篷饕褥蕊爨寒魏穗臻乏～。 X_《瓣势爨了窀瑟瑟棼筵稔，鬻羹诿鹱，=藏蕤褒黎鼗簿爨簿爨主燕演霎蘩粱戆 终掰。 撩鬻辩熬蕊涎芰蒸蕊霎蘧瓣凌舞夸辩惩，一篷襞黼鬻塞晨然褥瓣誊襄嚣塞琴裳 糕，继遮液披墩雅媳戥大薰熊产，燮声娥零挝擀，邋皴蕊毽工程技掌剡爆生熟赋戏 溪蘩寤麓液西点子蘩瓣褥裹霞灏袭遮爨。嚣一争麓瑟麓炎蒸稔激酶嚣魏黼不蘸藏垒 适疵锶耩蕊工泣窝葵麓鼗静赘求，翔獍逆稳、在动物体肉静祷效魏镣，籍溺燕攘酸 酶的热稳定燃。季Ⅱ用基因工稷的手段在公予水平上对基因避抒遗传操作，则霄望使 这些性能得翔改善。 攘酸酶农我霪熬起步较魄。辔肉许多大攀、科磺巯溪都贸展了这方甏的研究王 作e如四川大学对米曲霉发酵所产坐的植酸酶进行了分离纯化，并研究了纯酶的性 震；嚣镑轻工夫擎簿选了一株黑热霉，惩戳体培葵法生产毽酸酶毙鬣终A+／7cuum NRRL3135的活性商出近10倍：山谢大学自然筛选划