东北白鹅和籽鹅制素α-亚基成熟区编码序列的克隆与原核表达.pdf

中文摘要 抑制素(INH)主要抑制垂体促性腺激素FSH的合成和分泌，从而抑制了禽类的排卵和产蛋。 中的原核表达进行探讨，旨在为开展表达产物对提高家禽繁殖率的应用提供理论依据。 根据GenBank中鸡卵泡抑制素*亚基序列设计引物，对该序列按大肠杆菌嗜好密码子进行优 化，在设计的引物两端分别加上限制性内切酶Sad和肠DI的识别位点序列。利用RT-PCR技术 从东北白鹅和籽鹅卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素m亚基成熟区序列，经PcR扩增出354 bp 片段，该片段与pMDl8-T 切鉴定和PCR鉴定，并进行了测序分析，得到的克隆序列与设计的序列基本一致。表明成功地获 得了抑制素Ⅱ．亚基编码序列的克隆载体。与NCBI发表的鸡的相应序列对比，东北白鹅和籽鹅核苷 酸序列的同源性分别为94．44％和94．74％，其氨基酸序列的同源性分别为96．5％和97．35％，说明 INH-ct亚基的序列在禽类间具有高度保守性。 从阳性细菌中提取质粒，经Sael和Xhol酶切，回收354 bp目的片段，应用T4DNAligase连 体可很清晰地检测到INH-o．基因表达蛋白的特异带，由此证明INH-o．亚基的融合蛋白和凝血酶酶 切后的单体蛋白均有较好的免疫原性。 关键词：东北白鹅．籽鹅，抑制素m亚基，eDNA克隆，原核表达 Abs仃act lnhibiosareahormone to the and ofFSHfrom ofbiologicalactivitysuppresssynthesisreleasing so and are in ofthis focused ovulation pituitary,and egglayingsuppressedpoultry．Theemphasisstudy on and ofmatureinhibina-subaniteDNAofNortheastwhiteandZi cloningprokaryoticexpression in aimofthe isto theoreticalfoundationsfurthe gooseBL21(DE3)strain．Thepresentstudyprovide effectofrecombinanton poultryreproduction． protein Zi to Thelnhibinct-subunit ofNortheastwhiteand sequence gooseoptimizedaccording coding ands were sitesrestriction commoncodonsofE．coil．The and with ofFi Ri designedrecognition andXhoLMaturationZoneofInhibin-asubunitWaS of enzyme．SacI NortheastwhiteandZi ovarianfollicleRT-PCILTherecombinant 8T-INH-a goose by