人乙肝前表面抗presl和重组表面抗原ssl在家蚕中的表达.pdfVIP

摘 要 面抗原有望成为新一代的乙肝疫苗，) (尊有pres区的重组乙肝表 2S中分别扩增出片段preSl 和pBSS 本文通过!g垦壅婆从一pBSTPl 9aa)：将 (21．47aa)。利用家蚕线性化杆状病毒表达系统，将转移载体 pBacPAKpreSl(1．11 Bm．BacPAK，获得重组病毒VpreSl(1．11 分别在家蚕细胞和幼虫中进行了表达。 厂、 ／E 9aa)在细胞中的表达水平为 LIsA表明，重组蛋白preSl(1—11 【 202Vng／106细胞，Western 223ng／1 06细胞，在幼虫中达到2．2499／ml淋巴液，Western blotting 表明此重组蛋白表现为27kDa和29kDa两种蛋白形式。j一 关键词：乙肝病毒丫表面抗原，表达，家蚕V 第一章乙肝疫苗研究进展 乙型肝炎是一种世界性传染病，我国是高流行区，约有50—70％的人群受过 乙肝病毒的感染，其中8％-10％为乙肝表面抗原携带者，即约有一亿人口，根据 全国调查，我国现患肝炎病人约2000万人，其中1200万人为慢性肝炎患者。 因此在我国控制乙肝尤为重要。其最根本的措施应放在提高易感人群的特异免 疫力上以期达到暴露前预防。 一、乙肝病毒 1．乙肝病毒基因组 HBV的基因组为部分双链环状DNA。其长链或L(一)链的长度是固定的，约 是由于两条链的5’端各有一个粘端序列。 HBVL(一)链转录物含有4个开放阅读框架．而且在不同的HBV亚型中基因 的缺失或插入均为3的倍数，从而使读码框保持不变。相反，s(+)链的转录 物为无任何足够长度的ORF，因此，L(一)链带有病毒的全部编码容量，L(一) P区与其他三个ORF相重叠。 S区段编码病毒的外膜蛋白，分为S基因，前S1区段和前S2区段，C区段 有重叠，P区的表达产物为依赖于RNA的DNA聚合酶。HBVDNAX区段位于c区 段上游，可编码154个氨基酸，其多肽的确切意义尚不清楚。 2．乙肝病毒 完整的毒粒即Dane氏颗粒．直径为42nm．由外膜和核农壳组成，后者含 有一个环状的部分双链的DNA分子，DNA多聚酶，DNA结合蛋白及蛋白激酶 等。外膜是由表面抗原组成的病毒包膜。在慢性乙肝患者的血清中主要含有直 径为22rim的球状或管状的由HBsAg组成的空心外膜。核壳携带乙肝病毒核心 抗原(HBcAg)：当血清中存在毒粒时血清中还可发现一种与核壳有关的可溶性抗 原，即乙肝病毒e抗原(HBeAg)。 外膜携带的HBsAg的抗原性比较复杂，有一个种属特异性的共同抗原决定 簇a，至少两个亚型决定簇d／y和w／r，其中最常见的主要血清型为adw,adr和 ayw，我国以adr为主，adw次之。 外膜的三种蛋白称为主要蛋白，中蛋白和大蛋白。主要蛋白有226个氨基 酸，由S基因编码，它有糖基化与非糖化两种形式。主要蛋白有三个疏水区段； 7—23，80一98和169．226，为两个亲水区段所隔开。疏水区段的氨基酸保守，氨 基酸的变异主要在亲水区段。两个主要蛋白分子通过二硫链形成的二聚物是一 55 个结构单位，它具有完全的HBsAg抗原性，其中第二个亲水区段，即122—1 位，含有HBsAg主要的属和亚型的抗原决定簇。 外膜中蛋白由281个氨基酸组成，由前S2和S基因编码。fj{『S2蛋白区有 ～种多聚人血清白蛋白受体(PHSA—R)，能特异性地与人和黑猩猩血清的PHSA 结合，肝细胞本身也有该受体，PHSA介导HBV附着肝细胞。出前S2基因编 码的55个氨基酸中亲水性的居多，富含不依赖二硫链的连续抗原决定簇，具有 比S蛋白更强的免疫原性。 外膜大蛋白