亚洲ⅰ型口蹄疫毒vp1基因真核表达载体的构建及其免疫活性初探.pdf

摘 要 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起牛、羊、猪等偶蹄动物感染的一种急性、热性、高 度接触性和可快速远距离传播的世界性重大动物疫病，疫苗免疫仍然是目前以至将 来防控口蹄疫的主要策略之一。随着分子生物学的发展以及对口蹄疫病毒基因组结 构与功能的深入了解，口蹄疫疫苗研究在经历了“灭活疫苗”、“弱毒疫苗”两个 阶段后，已经向新型分子疫苗迈进。而核酸疫苗基于其诸多优点，已成为口蹄疫新 型分子疫苗研发的重要方向。 本实验拟将口蹄疫病毒主要免疫原基因VPl和能非特异性增强免疫应答能力的 白细胞介素一18(IL一18)基因，同时插入到真核表达载体，为口蹄疫新型分子疫苗 研究探索新的思路。首先从AsiaI型口蹄疫病毒中提取总RNA，用特异性引物，通过 反转录聚合酶链式反应获得了长度约750bp左右的核酸片段，将其与pGEM—T—Easy 载体连接，并转化大肠埃希氏菌JMl09。重组质粒经PcR分析和酶切鉴定以及确证性 测序证明，所克隆的片段含有完整的VPl基因：将重组质粒与表达载体pcPNA3．1(+) 分别用BamHI和EcoRI双酶切后连接，构建成重组表达质粒，转化宿主菌DH”经 酶切及扩增鉴定筛选出阳性克隆。测序证明，目的基因正确插入到表达载体，将它命 加强免疫一次，每次用ELISA检测豚鼠血清中的抗体水平。结果表明，疫苗pcDNAVI 可引发机体产生体液免疫，且有较强的保护效果。这将为口蹄疫基因免疫的研究提 供了基础，并为从分子水平上防制口蹄疫开辟了新的途径。 关键词：口蹄疫病毒；AsiaI型；真核表达载体；豚鼠 ofAsiaI FMDVVPlGeneRecombinant Construction Expression Vectorand ofIts Activity ElementaryAnalysesImmunological Summary disease a disease——foot Foot—and—mouth contagious Virus(FMDV、causeshighly isoneof animals．Vaccine methods —and—month cloven-hoofed major disease(FMD)in at in the of FMDnot butalsothe molecular future．With present development against only ofFMDV and structureandfunction further of genome，FMD biology understanding vaccine”andhas has vaccine”and“attenuated vaccine