乳酸菌载体系统达猪传染性胃肠炎病毒n蛋白及其对小鼠免疫效力的研究.pdfVIP

摘要 猪传染性胃肠炎(Transmissible (Transmissible virus，TGEV)引起的猪的～种急性高度接触性传染病。该病厂‘泛 gastroenteritis ～ 分布于世界各地，给畜牧业造成严重危害。结合TGEV的致病特点、免疫特性探索开发安全、 廉价、效力稳定的新型疫苗对预防该病具有重要的意义。乳酸菌被公认为安全级(generally zedas recogni safe，GRAS)微生物，是作为黏膜免疫的活载体的理想选择。近二十年来， 对于表达外源抗原的乳酸菌作为口服免疫活载体疫苗的研究已经受到了广泛的重视并l双得了 一定进展。 6．0软件 本研究以含有猪传染性胃肠炎病毒N基因的重组质粒pHN为模板，利用Oligo 设计并合成2对TGEV N基因引物，通过PCR分别扩增出两端含有Ncol、Sael酶切位点N 将粘性末端的N基因与乳酸乳球菌表达载体pNZ8048连接，连接产物电转化至乳酸乳球菌 ng／ml 大小相符的43kD重组蛋白，说明N基因在乳酸乳球菌表达系统中获得表达。光密度扫描对 表达产物进行初步定量，表明重组蛋白约为菌体总蛋白的8．3％。将含有BamHl、XholI酶切 定后，将粘性末端的N基因与干酪乳杆菌表达载体pPG611．1连接，连接产物转化入大肠杆 酪乳杆菌Lactobaci胁casei 393中，得到含有pPG61I．1-N表达载体的干酪乳杆菌 393。用1％核糖和1％乳糖诱导重组干酪乳杆菌后，SDS pPG611．1-N／Lactobacj肌，casei 分析表达产物，结果显示1％核糖诱导的重组干酪乳杆菌产生预计大小相符的49kD的融合蛋 白，说明N基因在干酪乳杆菌表达系统中获得表达。光密度扫描对表达产物进行初步定量， 表明重组蛋白约为菌体总蛋白的2．7％。将重组乳酸乳球菌悬液和菌体裂解物分别通过口服途 径和腹腔注射途径免疫小鼠，间接ELISA方法检测小鼠粪便中lgA抗体和血清中lgG抗体。 检测结果表明免疫小鼠产生了针对TGEVN蛋白的特异性局部免疫应答和全身免疫应答。本 研究为探索开发预防猪传染性胃肠炎的有效121服疫苗提供物质依据，也可以为猪传染性胃肠 ● 炎病毒N基因的作用和功能的研究提供参考。 ■ 关键词表达系统；乳酸乳球菌：干酪乳杆菌；口服疫苗；猪传染性胃肠炎病毒；N基因 V EXPRESSIONOFTRANSMISSIBLE GASTROENTERITISVIRUS N INLACTICACIDBACTERIA ANDANALYSISOF IMMUNERESPONSES ELICITEDBYTHE I之ECOMBINANTSTRAINSIN MICE Abstract Transmis