乳酸杆菌ppg粒表达系统理想表达条件的探索.pdfVIP

摘要 相对于大肠杆菌原核表达系统，乳酸菌表达系统还不够成熟，主要表现在外源蛋白的表 达量较低、乳酸菌的某些遗传背景不够清楚，操作比较繁琐，表达条什相对不够稳定等，因 此探索乳酸菌载体系统适宜的表达条件，提高表达量，建立乳酸菌表达系统的技术平台t对 表达的外源蛋白更有效的发挥作用具有重要的实践意义。 本试验对乳酸杆菌pPG质粒表达系统理想表达条件进行了探索，以干酪乳杆菌 Lactobacilluscasei 393为宿主菌，B-葡萄糖苷酸酶(gusA)基因作为表达的报告基因，探索 了其表达过程中诱导物种类、诱导物浓度、诱导时间、培养基pH、培养方式等各个影响表达 的关键因素进行了研究。试验结果表明，活化的种子菌以1％接种于MRS液体培养基，并用 菌液浓度至A5900D达0．5，表达效率晟高，外源蛋白的表达量可占菌体总蛋白的14％。分泌 blot 表达载体干酪乳杆菌pPG-2／L．393上清液分别经4C透析和冷冻干燥浓缩50倍后，West 此说明干酪乳杆菌pPG-2／L．393表达的gusA目的蛋白仍结合在菌体上：培养基中葡萄糖的浓 见明显影响，而当其含量达到0．5％时。表达量明显下降，至葡萄糖浓度达到2％时．基本看 不到gusA的表达．试验通过对乳酸杆菌pPG质粒表达系统理想表达条件的探索为更好利用 该系统表达活性蛋白(肽类)奠定了基础． 关键词乳酸杆菌；干酪乳杆菌；表达系统：}葡(萄)糖苷酸酶(gusA) in of Conditions OptimalExpression Exploration Lactobacilluseaselwith Vector pPG Abstract acid witlltheE．colis ofLactic Comparison expressionsysteIll．theexpressionsystem immature．Itreflectsonthe Ievelof bacteria(LAB、is mainly followings：lOWexpression character’S of ambiguity,troublesome heterologonsprotein,somegenetic operation，instability conditionandSOOIL suitable conditionsofLAB expression Thercfore．exploratingexpression VeCtorsto levelandestablishthe ofLAB’S was ireproveexpression platform expressionvery has onthe itsfunction． important．Itpracticalsignificanceheterologousproteinrealking The