耐高渗(高糖)母菌株的选育.pdf

摘要 浓醪发酵是酒精工业生产的新趋势，这种发酵工艺所生成的酒精浓度较高， 同时醪液中的糖度也高。这样发酵醪液的渗透压较高，引起细胞内水分活度、细 胞质组成发生显著变化，酵母的细胞膜和茵体内的酶受到破坏，从而抑制酵母的 生长和发酵。国内外已有很多选育耐高浓度酒精酵母菌的筛选，但耐高糖酵母菌 的筛选却少见。若要选育出耐高糖酵母菌，可以很好的为酒精工业的生产服务。 ， ＼’ 鉴于此，本文进行了以下研究：酵母菌的耐高糖驯化；对驯化出的优良菌株进行 ， 原生质体菌悬液的制备研究，并做原生质体紫外诱变，以选育出耐高糖酵母菌株； 利用选育出的耐高糖酵母菌进行酒精发酵试验。 主要研究结果有： 1．利用逐步提高培养基糖浓度的方法对初始酵母菌进行耐高糖驯化。结果 表明，酵母菌驯化后，能在30％糖浓度的培养基中生长发酵良好。 2．驯化出的优良酵母菌株培养到对数期，经B一巯基乙醇一EDTA—PB溶液预处 理，蜗牛酶溶液酶解后，生孢培养基双层平板培养，长出菌落后计数，计算原生 质体分离率和原生质体再生率。结果表明，原生质体分离率97．9％：原生质体再 生率19．8％。 3．以驯化出的优良菌株为出发菌株，进行原生质体紫外诱变。对诱变时间 和诱变距离优化。结果表明，原生质体紫外诱变最佳条件为：诱变时间为18s， 诱变距离20cm。诱变后通过初筛和复筛后选育出的菌株YB一23在40％糖度下产气几 乎充满整个发酵杜氏小管，在65％糖浓度下仍能起酵。并且在发酵力、产酒精能 力、残留还原糖浓度等方面都优于出发菌株。菌落、细胞形态良好。稳定性试验 表明稳定性良好。 4．利用选育出的酵母菌进行酒精发酵试验，包括小瓶发酵单因素试验，正 交试验设计设计优化发酵工艺条件，IOL发酵罐小试试验。结果表明：最佳发酵 工艺条件为：水料比1．5，初始pH4．5，糖化酶用量120U／g，酵母接种量14％。 发酵罐小试试验表明效果良好，发酵72h产酒精量为16．0％(v／v)，发酵性能明 显优于出发菌株。原始菌株发酵72h产酒精量为15．1％(v／v)。筛选出的菌株酒 精产量比原始菌株提高5．96％。 关键词：酵母菌，耐高糖，原生质体，紫外诱变，酒精发酵 Abstract of fermentationisthenewtrendindustrial of alcohol，This Highgravity production fermentation a alcohol a concentration，and processgenerateshigher highersugar fermentedmashof contentinfermentationThis osmotic liquon high pressure．There willbe intheIntracellularwater andthe a change