米糠蛋白的提取其抗氧化肽的研究.pdf

摘要 本文以新鲜米糠、膨化米糠、脱油米糠为原料，采用 3 种化学提取法，以 蛋白质提取率为指标，通过正交试验确定了米糠蛋白提取的料液比、pH 、温度、 时间、盐溶液的浓度；同时，研究了米糠抗氧化活性肽的制备、分离纯化以及抗 氧化效果。其结果如下： 1. 碱法提取的结果表明，新鲜米糠蛋白的最佳工艺条件：时间 2.5h，pH 值 11，温度 30 ℃，料液比 1:11，提取率为 34.49%；膨化米糠最佳工艺条件：时间 2.5h，pH 值 12，温度 50℃，料液比 1:9，提取率为 25.44% ；脱油米糠最佳工艺 条件：时间 3h，pH 值 13，温度 35 ℃，料液比 1:10，提取率为24.3% 。酸法提取 的结果表明，新鲜米糠最佳工艺条件：时间 3h，pH 值 0.5，温度 35 ℃，料液比 1:11，提取率为 25.88% ；膨化米糠最佳工艺条件：时间 3.5h，pH 值 0.5，温度 35 ℃，料液比 1:10，提取率为 33.64%；脱油米糠最佳工艺条件：时间 3.5h，pH 值 0.5，温度40 ℃，料液比 1:8，提取率为 18.18%。盐法提取的结果表明，新鲜 米糠蛋白最佳工艺条件：NaCl 为 0.6mol/L，温度 35 ℃，料液比 1:11，时间 3.5h ， 提取率为 15.66%。膨化米糠最佳工艺条件：NaCl 为 0.4mol/L，温度40 ℃，料液 比 1:11，时间 3.5h，提取率为 15.55%；脱油米糠最佳工艺条件：NaCl 为 0.6mol/L ， 温度 45 ℃，料液比 1:10，时间2.5h，提取率为 7.86% 。3 步法的总蛋白质提取率 分别为：新鲜米糠达 60.12%，膨化米糠达 56.57%，脱油米糠为48.23% 。 2. 以所提取的新鲜、膨化、脱油 3 种米糠蛋白为对象，研究了胰蛋白酶、 胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶水解这三种米糠蛋白的进程特 性，并考察经 5 种蛋白酶水解后3 种米糠蛋白酶解物对 ABTS 自由基的清除效果， 从中筛选最合适制备米糠抗氧化肽的酶和米糠蛋白。同时，采用响应面法优化了 碱性蛋白酶水解脱油米糠蛋白制备抗氧化肽的工艺参数，结果表明：选用碱性蛋 白酶和脱油米糠蛋白制备抗氧化肽的效果最好；最佳酶解条件为：酶与底物浓度 [E]/[S]比为 1.8%、温度 50℃、时间 4.6h、pH9.0 、底物浓度[S]为 5.0%，所得肽 对 ABTS 自由基具有较强的清除作用，清除率达7 1.85%。 3. 以脱油米糠蛋白酶解物为对象，选用 6 种体外抗氧化模型对其抗氧化活 性进行了测定，研究了不同水解度以及 RBPHs 浓度对氧化效果的影响，结果表 明：不同水解度的 RBPHs 具有不同的抗氧化活性，不同的模型均有各自的最适 的DH ；RPBHs 的活性与浓度均成正相关，对DPPH·清除效果最为明显，其 EC50 仅为 0.52mg/mL 。 4. 采用纤维素 DEAE-52 离子交换层析和凝胶 Sephadex G-15 分离纯化 RBPHs，所得组分 G ，经薄层层析初步鉴定其纯化效果。通过氨基酸组分析， 4 - I 得到 G4 的主要氨基酸组成为：Asp 、Glu 、Leu 、Phe、Arg 、Pro ；经HPLC 分析 G4 分子量的分布，得相对分子质量小于 1000 的比例达到 90.83%，分子量小于 500 的达到 14.38%。 关键词：米糠蛋白质；化学提取法；抗氧化肽；分离纯化；抗氧化活性 - II Abstract Fresh rice bran, expanded rice bran and defatted rice bran were used to extract rice bran protein by three kinds of chemical methods . The yield of protein in rice bran extracted was a key index. The materia