福眼龙眼(Diocarpus longan Lour.cv.Fuyan)POD的分离纯化与若干采后生理的初步研究.pdf

摘要 多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)是影响龙眼果实采后果皮褐变的关 键酶。本研究以福眼龙眼为材料，经过提取、饱和度为30％～80％的硫酸铵分 级沉淀、Sephadex S．200 HR柱分子筛色谱等步骤，首次对成熟期果实果皮中的 层析和Sephacryl 过氧化物酶进行了纯化研究。 5％～20％的线性水平板梯度胶半干电泳的试验结果表明，纯化得到的蛋白 经与POD同工酶染色结果对照，显示所获得的4个组分的蛋白质为4个不同分 子大小的POD酶。sDs．PAGE结果显示，纯化得到的这4个过氧化物酶中， 和170．7KD的3个POD酶分别是由该单一亚基组装形成的5聚体、4聚体和3 聚体，分子量为188．5KD的POD酶可能是异型多体蛋白。 果皮中的过氧化物酶(POD)与多酚氧化酶(PPO)同工酶电泳显示，这两 种酶的酶谱条带的迁移率表现一致。经过DEAE．Cellulose离子交换柱层析分离 后，POD被分成2个部分，以最终纯化得到的这4个组分为前一个部分，在总 POD活性中占绝对优势：后一个组分活性}ltd,。 对纯化得到的POD酶的生化特性进行了初步研究，发现其对愈创木酚反 应的最适pH值为7．0，对4．甲基邻苯二酚和邻苯二酚的最适反应pH值分别为 8．5和9．0；同时，纯化得到的POD办表现出PPO活性。其对底物邻苯二酚和 4一甲基邻苯二酚表现出不同的催化氧化反应特性。对于4．甲基邻苯二酚的活性 在pH6．0～pH8．0范围内呈上升趋势。 综合研究结果表明，从龙眼果皮POD和PPO的同工酶谱一致；分离纯化的 POD也具有PPO活性；在H202存在的情况下，POD对于酚类物质具有氧化能力， 不仅能氧化一元酚，还能氧化二元酚。因此可以认为，福眼龙眼果皮中的POD 矛DPPO应是同一蛋白质。 文中还对POD、PPO与果实采后衰老和褐变进行了讨论。 本试验还对福眼龙眼果实采后衰老和褐变过程中的生理生化变化进行了初 步研究。 关键词：龙眼；过氧化物酶；分离纯化：同工酶；多酚氧化酶；采后生理。 Abstract the roles oflonganbrowning Peroxidase(POD)andoxidase《PPO)playimportant polyphenol in wasextractedfrom Lots．cv． longan periodofpostharveststorage．POD longan(Dimocarpus itsmaturationwithextractionbuffer．Thecrude extractwas Fuyan、fruitduring enzyme with sulfatebetween30％and the fractionatedsolidammonium 80％saturation，then enzyme column DEAE·Cellulose solutionwas G-25 desalted bySephadex chromatography，separatedby column and S-200HR chro