流苏石斛多糖分纯化、结构分析及免疫活性的研究.pdf

流苏石斛多糖分离纯化、结构分析及免疫活性的研究 摘 要 流苏石斛是一种兰科石斛属多年生草本植物，为 《中国药典》（2010 版） 收录。本文对流苏石斛多糖进行了提取、分离纯化、结构鉴定和免疫活性的研 究。 干燥的流苏石斛茎粉末脱色脱脂后，通过响应面优化法确定水溶性多糖 WDFP 的最佳提取条件为：温度82°C ，时间51 min ，液料比33.3 : 1 ，在此条 件下 WDFP 的提取得率为 9.68% 。水溶性多糖提取后的残渣先后进行碱溶液提 取和酸溶液提取，获得碱溶性多糖 BDFP 和酸溶性多糖 ADFP 。WDFP 经 DEAE-Cellulose 阴离子交换色谱柱分级得到五个组分：WDFP- 1、WDFP-2 、 WDFP-3 、WDFP-4 和WDFP-5 。经葡聚糖凝胶渗透色谱，从 WDFP- 1 中分离获 得 3 种均一性多糖 WDFP- 1a、WDFP- 1b 和 WDFP- 1c，其相对分子量约为2.4 × 104 Da 、1.5 × 104 Da 、和7.6 × 103 Da ；从WDFP-4 中分离获得 1 种均一性多糖 WDFP-4a ，其相对分子量约为2.3 × 106 Da ；从WDFP-5 中分离获得 1 种均一性 多糖WDFP-5a ，其相对分子量约为 1.9 × 106 Da 。 采用甲基化分析、红外光谱分析、气相色谱分析、气质联用分析、核磁共 振波谱分析等方法，对各均一多糖进行了结构鉴定。结果表明：（1）WDFP- 1a 由葡萄糖和甘露糖构成，摩尔比为2.41 : 1.00 ，其主链由 1,4-linked β-D-Manp 和 1,4-linked β-D-Glcp 构成，在 1,4-linked β-D-Manp 的O-2/3 位存在乙酰基； （2 ）WDFP- 1b 由葡萄糖和甘露糖构成，糖苷键类型主要有 1,4-linked Glcp 、 1,6-linked Manp 、1,3,6-linked Manp 和 1-linked Glcp ，其摩尔比约为3.99 : 2.81 : 1.08 : 1.00；（3 ）WDFP- 1c 由葡萄糖和甘露糖构成，糖苷键类型主要有 1,4-linked Glcp 、1,6-linked Manp 、1,3,6-linked Manp 和 1-linked Glcp ，其摩尔比约为4.05 : 3.19 : 1.13 : 1.00 ；（4 ）WDFP-4a 由半乳糖、葡萄糖和甘露糖构成，糖苷键类型 主要有 1,6-linked Galp 、1,4-linked Glcp 、1,3,6-linked Manp 和 1-linked Glcp ， 其摩尔比约为 9.28 : 5.41 : 1.03 : 1.00 ；（5 ）WDFP-5a 由半乳糖、葡萄糖和甘露 糖构成，糖苷键类型主要有 1,6-linked Galp 、1,4-linked Glcp 、1,3,6-linked Manp 、 1,3,6-linked Galp 和 1-linked Glcp ，其摩尔比约为 15.53 : 7.71 : 1.72 : 1.00 : 2.63 。 利用NMR 技术，对各均一多糖组分中单糖残基的C 、H 进行了归属。 免疫活性检测结果表明，流苏石斛多糖具有较高的肠道免疫活性，但不同 多糖组分之间差异较大，其中 WDFP 、WDFP- 1 和WDFP- 1b 活性较高。 关键词： 流苏石斛；多糖；分离纯化；结构表征；免疫活性 Research on isolation, purification, structural identification and immunostimulating activities of the polysaccharides from Dendrobium fimbriatum Hook. ABSTRACT Dendrobium fimbriatum Hook. (Dend