平贝母生物碱的取纯化及体外抑菌活性的研究.pdf

摘 要 平贝母是我国东北地区常见的一种天然药用植物资源，为百合科贝母属植物。平贝母主要功 效成分为生物碱，这些生物碱有明显的镇咳、祛痰、平喘等功效，对呼吸道疾病有较好的治疗作 用。因此深入研究平贝母的功效成分的提取、纯化及其功效评价可为医药及保健食品加工提供技 术参考，并对进一步开发利用这一资源起到较好的促进作用。 本课题来源于黑龙江省科技攻关项目：《北药功能成分的提取在保健食品中的应用研究》(编 号为Gc04c50102)，以黑龙江地产平贝母的干燥鳞茎为研究对象，对平贝母中总生物碱的提取、 分离纯化、体外抑菌活性进行了研究，主要研究内容及结果如下： 1．平贝母中生物碱含量测定方法的研究 用酸性染料比色法对平贝母样品中总生物碱的含量进行了测定，测定结果：平贝母样品中总 生物碱含量为O，236％。用高效液相色谱一蒸发光散射检测器法(HPLc-ELSD)对平贝母样品中 主要的生物碱单体含量进行了测定，测定结果：平贝母样品中贝母素甲含量为O．0132％，贝母素 乙含量为O，0181％。 2．平贝母中总生物碱提取技术的研究 应用溶剂提取法和超临界二氧化碳萃取法提取平贝总碱，并将这两种方法进行了优化。 溶剂提取法先采用单因素试验，分析了乙醇浓度、提取时间、料液比和浸提时间对平贝总碱 提取率的影响，然后采用均匀试验设计法优化了平贝总碱的提取工艺参数，确定出最佳提取方案 为：乙醇浓度95％、提取时间6h、料液比1：9、浸泡时间1h，在此条件下平贝总碱提取率为87．12％。 超临界二氧化碳萃取法先采用单因素试验，确定了萃取压力、萃取温度、携带剂种类、携带 剂用量和C02流量等单项条件对平贝总碱提取率的影响，然后采用正交试验优化了平贝总碱的 提取工艺参数，确定出最佳提取方案为：萃取压力20MPa，携带剂用量300ⅡlL，萃取时间2h， 萃取温度45℃，c02流量20kgm，分离压力8MPa，分离温度40℃，在此条件下平贝总碱萃取 率为92．14％。与溶剂提取法进行比较，超临界二氧化碳萃取平贝总碱的提取率是溶剂提取平贝 总碱提取率的1．1倍。 3．平贝总碱体外抑菌试验的研究 采用纸片扩散法考察了平贝总碱对几种常见呼吸道致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、克 雷伯氏肺炎杆菌、铜绿色假单胞杆菌)的体外抑菌作用，用琼脂平板稀释法测定了平贝总碱对这 几种致病菌的最低抑菌浓度。试验结果表明：平贝总碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、克雷伯氏 肺炎杆菌、铜绿色假单胞杆菌均有一定的抑菌作用。对克雷伯氏肺炎杆菌的最低抑菌浓度为 2．5m驴nL；对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿色假单胞杆菌的最低抑菌浓度为5m加nL。 4．平贝总碱分离纯化技术的研究 采用硅胶干柱层析法对平贝总碱进行分离纯化，分离出贝母素甲和贝母素乙。固定相为薄层 层析硅胶G，流动相为乙酸乙酯一甲醇．氨水(17：2：1)。用HPLc．ELsD法对分离出的贝母素甲和 贝母素乙的纯度进行了测定。测定结果：贝母素甲纯度为93．19％、贝母素乙纯度为92．09％。 关键词： 平贝母，平贝总碱，提取，体外抑菌，分离纯化，硅胶柱层析 Abstract 蹦tillariaussuriensisMax油isofFLiliaceaeanditwidespreadinnonlIeast plant nat啪lly iIl Chlm．Thebulbscon乜mallcaloids isknownthat也e出aloi如havebeenused in酽edien谯，It is snldiesfor asmma．Therefore，itslgrdficant relievillgcou曲，remo啊ng山ephlegm柚drelieVing andheal吐lfood medicille pmcessin