食品生物学检测,志贺氏菌检最简单的实验方法.pdfVIP

北京九和永泰科技有限公司-济南办事处 三菱产气袋培厌氧微生物养系列产品本公司中国总代理 联系人:赵亮 电话：1座机电话号码63 qq：座机电话号码6 最经济实惠的厌氧培养系列产品 — - - - - GB 4789.5-2012 前 言 本标准代替GB/T 4789.5-2003 《食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验》。 本标准与 GB/T 4789.5-2003 相比，主要变化如下： ——修改了标准名称； ——修改了培养基和试剂； ——修改了操作步骤中增菌部分和生化试验及附加生化试验部分； ——修改了表2 ； ——修改了表4 。 I GB 4789.5-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验 1 范围 本标准规定了食品中志贺氏菌 Shigella 的检验方法。 本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： a） 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃； b） 冰箱：2 ℃～5 ℃； c） 膜过滤系统； d） 厌氧培养装置：41.5 ℃?1 ℃； e） 电子天平：感量 0.1 g； f） 显微镜：10×～100×； g） 均质器； h） 振荡器； i） 无菌吸管：1 mL （具0.01 mL 刻度）、10 mL （具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头； j） 无菌均质杯或无菌均质袋：容量 500 mL； k） 无菌培养皿：直径 90 mm； l） pH 计或 pH 比色管或精密pH 试纸； m） 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3.1 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：见附录 A 中A.1 。 3.2 麦康凯（MAC ）琼脂：见附录 A 中A.2 。 3.3 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD ）琼脂：见附录 A 中A.3 。 3.4 志贺氏菌显色培养基。 3.5 三糖铁（TSI ）琼脂：见附录 A 中A.4 。 3.6 营养琼脂斜面：见附录 A 中A.5。 3.7 半固体琼脂：见附录 A 中A.6 。 3.8 葡萄糖铵培养基：见附录 A 中A.7 。 3.9 尿素琼脂：见附录 A 中A.8 。 2 GB 4789.5-2012 3.10 β-半乳糖苷酶培养基：见附录A 中A.9 。 3.11 氨基酸脱羧酶试验培养基：见附录 A 中A.10 。 3.12 糖发酵管：见附录 A 中A.11 。 3.13 西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录 A 中A.12 。 3.14 粘液酸盐培养基：见附录 A 中A. 13 。 3.15 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录 A 中A.14 。 3.16 志贺氏菌属诊断血清。 3.17 生化鉴定试剂盒。 4 检验程序 志贺氏菌检验程序见图 1。 3 GB 4789.5-2012 检样 25 g （或25 mL ）样品+志贺氏菌增菌肉汤 225 mL 41.5 ℃± １℃， 16 h～20 h 厌氧培养 XLD MAC 或志贺氏菌显色培养基 36 ℃±１℃，20 h～48 h 挑取可疑菌落 TSI，半固体， 营养琼脂斜面 血清学分型 生化鉴定 志贺氏菌属分群及分型结果 报告 图1 志贺氏菌检验程序 5 操作步骤 5.1 增菌 以无菌操作取检样 25 g （mL ），加入装有灭菌 225 mL 志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均 质器以 8 000 r/min～10 000 r/min 均质；或加入装有 225 mL 志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质 器连续均质 1 min～2 min ，液体样品振荡混匀即可。于 41.5 ℃± １℃，厌氧培养 16 h～20 h 。 5.2 分离 取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD 琼脂平板和MAC 琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板 上，于 36 ℃?1 ℃培养 20 h～24 h ，观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大 于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至 48 h 再进行观察。志贺氏菌在 不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表 1。 4 GB 4789.5-2012 表 1 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 志贺氏菌的菌落特征 MAC 琼脂 无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐 XLD 琼脂 粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐 志贺氏菌显色培养基 按照显色培养基的说明进行判定 5.3 初步生化试验 5.3.1 自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一 管，置36 ℃?1 ℃培养20 h～24 h，分