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酵母培养操作规程 本文主要介绍酵母的选育、保种、培养的操作工艺等。 目 录第一章??酵母扩培 …………………………………………………………………（2）§1-1 实验室扩培 …………………………………………………………………（2） 1培养基制备 ……………………………………………………………………（2） 2接种操作 ………………………………………………………………………（3）§1-2??生产现场扩培??……………………………………………………………（5） 1准备工作 ………………………………………………………………………（5） 2汉生罐接种操作 ………………………………………………………………（5） 3扩大罐扩培 ……………………………………………………………………（5） 4二次（车间）扩大罐扩培 ……………………………………………………（6）第二章 菌种保藏 …………………………………………………………………（7） 1实验室菌种保藏与活化……………………………………………………（7） 2汉生罐菌种保藏与活化……………………………………………………（7）第三章 酵母检测 …………………………………………………………………（8）§3-1??取?? 样 ……………………………………………………………………（8） 1扩培液、发酵液及待滤酒等的取样 …………………………………………（8） 2酵母泥的取样 …………………………………………………………………（8）§3-2??检?? 测 …………………………………………………………………（10） 1酵母细胞形态检测 ……………………………………………………………（10） 2酵母细胞大小测定 ……………………………………………………………（10） 3酵母泥外观检测 ………………………………………………………………（11） 4酵母细胞数和出芽率的测定（血球计数板法） ……………………………（11） 5酵母死亡率的测定（血球计数板法）…………………………………………（12） 6酵母肝糖染色法 ……………………………………………………………（13） 7酵母凝聚性的测定 …………………………………………………………（14） 8酵母死灭温度的测定……………………………………………………………（15） 9酵母发酵失重实验 ……………………………………………………………（16） 10酵母的呼吸缺陷型检测 ………………………………………………………（16）第一章??酵母扩培§1-1??实验室扩培1培养基制备【试剂】：冷麦汁、蒸馏水、新鲜鸡蛋。【器具】：试管（15×150）及（18×180）、小巴氏瓶（三角瓶）、大巴氏瓶（大三角瓶）、卡氏罐、中速滤纸、电炉、量筒、不锈钢锅、糖度计等。【仪器】：杀菌锅、天平（精度0.1g）。【方法】〖试管、三角瓶及巴氏瓶培养基的制备〗 取样：取糖化冷却麦汁，视麦汁浊度情况判定是否进行过滤。2，按每0.5~1L使用一个鸡蛋的比例，加入打成泡沫的蛋清，在不断地搅拌下保温30min；然后升温煮沸30min；将煮沸后的麦汁用水浴冷至80~90，用双层中速滤纸过滤。 澄清：将麦汁加热至450.2°P。 调糖：将过滤后的麦汁用蒸馏水调整糖度为11 分装：试管（15×150）5mL，试管（18×180）10mL，分装小巴氏瓶（三角瓶）、大巴氏瓶（大三角瓶）。 灭菌：分装后包扎好，115杀菌20min；杀菌后培养基放置2~3天，确定无菌后备用。 〖卡氏罐培养基的制备〗?? 取糖化冷却麦汁（有条件的可取薄板前热麦汁）加入卡氏罐，然后封闭卡氏罐取样口，各呼吸阀等接口处均应以棉塞或呼吸阀进行封闭后包扎结实，115杀菌30~40min，于室温冷却至17~18；接种前以3L/min的速率充纯氧2~3min（卡氏罐有效容积20L）。2接种操作【器具】：酒精灯、酒精棉、剪刀、接种针、镊子、定量移液器或吸管等。【仪器】：超净工作台等。【方法】无菌室使用前，使用紫外线灯照射20~30分钟进行杀菌；进入无菌室换无菌工作服；所有操作采用无菌操作。〖活化〗 操作前将冷冻管菌种置于室温下，使之内部培养基达到室温后，振荡均匀；无菌操作，将冷冻管内的培养液全部转入盛有5mL培养基的试管中，于25±1培养72±2小时。 将试管中的培养液轻轻振荡均匀，用接种环接取三环加入另一支盛有5mL培养基的试管中，于25±1培养24~36小时。 将培养结束的试管培养液轻轻振荡均匀，用无菌吸管接0.1mL加入盛有10mL培养基的试管，振荡均匀后于25±1培养24~36小时。〖扩大〗 将培养结束的试管培养液轻轻振荡均匀后，全部接入小巴氏瓶（三角瓶），每个小巴氏瓶（三角瓶）接入