第二章薄层色谱分离技术.ppt

第二章 薄层色谱分离技术 第一节 薄层色谱概论 第二节 制备薄层色谱 第三节 离心薄层色谱 第四节 制备型加压薄层色谱 第一节 薄层色谱概论 薄层色谱 (Thin-Layer Chromatography TLC) 是快速分离、定性和定量分析的一种非常重要的色谱技术。 它是将固定相涂布于玻璃，铝铂，塑料片等载板上形成一均一薄层。将被分离的物质点加在薄层的一端，置展开室中，选用适当的展开剂，借毛细作用从薄层点样的一端展开到另一端，使性质不同的物质得以分离。 一、TLC的分离原理 分离原理随所用固定相不同而不同，可分为: (l) 吸附薄层色谱 采用硅胶、氧化铝等吸附剂铺成薄层，利用吸附剂表面对不同组分吸附能力的差别达到分离的目的。 (2) 分配薄层色谱 由硅胶、聚酰胺和纤维素铺成薄层，不同组分在指定的两相中有不同的分配系数。 (3) 离子交换薄层色谱 由含有交换活性基团的纤维素铺成薄层。 (4) 分子排阻薄层色谱 也称凝胶薄层。利用样品中分子大小不同、受阻情况不同加以分离。 (5) 亲和薄层色谱 利用酶、受体、抗原抗体特异性识别作用。 二、TLC 的技术参数 1. 比移值: 一个化合物在薄层板上上升的高度与展开剂上升的高度的比值称为该化合物的比移值（Rf 值）。是薄层色谱的基本定性参数。 2．相对比移值 (R i，s) 由于影响被分离物质在薄层上移动距离的因素较多，因此R f值的重现性较差，如果将被分离物质与一参比物点在 同一块薄层上，用相同的色谱条件进行分离。相对比移值就是被分离物质(s)和参比物(i)的Rf值之比，或是被分离物质(s)和参比物（i) 在薄层上移动距离之比. 由于参比物的Rf值或移动距离可大于或小于被分离物质的Rf值或移动距离，因此相对比移值可大于或小于 l，但其重复性及可比性均优于R f值。相对比移植以下式表示： R i,s = R f(i) / R f(s) 三、TLC的应用特点： TLC不仅适合于小量样品的制备，也可用于较大量样品的纯化。如果将薄层加宽加厚，把样品点成一条线，能分离几百毫克样品。尤其是对于Rf值相近的物质的分离。 TLC除了用于分离外，更主要的是通过与已知结构化合物相比较，来鉴定少量有机混合物的组成。此外, 经常利用 TLC寻找柱色谱的最佳分离条件。 常用的两种制备型薄层色谱包括： 传统的制备薄层法（PTLC），即流动相借毛细作用流经固定相。 借外力强制性的使流动相流经固定相，如离心薄层和加压薄层。 第二节 制备薄层色谱(Preparative Thin Layer Chromatography PTLC) 一、固定相及载体 二，粘合剂与添加剂 三、薄层板的制备 四，上样 五、展开剂选择 六、薄层展开 七、检测方法 八、被分离物质的收集 九、PTLC分离化合物的纯化 经典的制备型薄层色谱，设备简单，操作方便。薄层色谱与常压柱分离配合使用，仍然在实验室中有较多的应用。尤其是在一些没有现代分离手段的实验室中广为使用。 一、固定相及载体 1．固定相：薄层色谱必须将被分离物质点于固定相上进行分离，固定相要根据被分离化合物的性质来选择。 分离亲脂性化合物常常选用硅胶，氧化铝，乙酰纤维素及聚酰胺。 分离亲水性化合物常常选用纤维素，硅藻土及聚酰胺。 但也有例外，脂溶性叶绿素在氧化铝及纤维素上均能得到较好的分离。 2．载体：玻璃板，铝箔，塑料片等（吸附薄层）； 纤维素，硅藻土（分配薄层） （1）．硅胶：是最常用的薄层固定相，90％以上分离工作都应用之。 １） 普通型硅胶：无定型多孔粉末，表面带有硅醇基，呈弱酸性。因为有一羟基(silanol Si-OH)，呈弱酸性（PH = 4.5）,　通过硅原子上的羟基与极性化合物或不饱和化合物形成氢键， 所以表现为吸附性能。硅胶吸附水分形成水合硅醇基，降低吸附能力。通常在150℃活化后失水提高活度，此时约有4－6个硅醇基/nm2,。（温度大于500℃，硅胶脱水形成硅醚（Si－O-Si）,而失去吸附能力）。 — 活性硅胶适合分离酸性或中性化合物，如酚类，醛类，生物碱类，甾体及氨基酸类，是基于吸附作用； — 非活性硅胶含有一定量的水分，在分离色素等时，是基于分配作用。 ２） 改性硅胶：借化学反应，将有机分子键合在硅羟基上，故称化学键合固定相。可分为极性键合相和非极性键合相。 ① 极性键合硅胶：含极性基团（如氰基，氨基，二醇基），与普通硅胶相比活性低。一般作正相色谱，用非极性或极性溶剂为展开剂 ② 非极性键合硅胶：键合相表面为极性极小的烃基如18烷基，乙基，辛基等。最常用的是18烷基键合硅胶。用极性较大溶剂为展开剂或无机溶剂为展开剂。因为Rf与正相