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色谱分析部分 河北医科大学分析化学教研室 樊淑彦 第一章 色谱分析法概论 简介 色谱分析法简称色谱法是一种物理或物理化学分离分析方法。 历史上1948年瑞典科学家Tiselins因电泳和吸附分析的研究而获诺贝尔化学奖，1952年英国的马丁（ Martin)和辛格(Synge)因发展分配色谱而获诺贝尔化学奖。 简介 色谱法创始于20世纪初，早在1903年由俄国植物学家茨维特分离植物色素时采用。 他在研究植物叶的色素成分时，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。这种方法因此得名为色谱法。以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义，但仍被人们沿用至今。 第一节 色谱法的分类和发展 从不同角度，可将色谱法分类如下： 1. 按两相状态分类 第一节 色谱法的分类和发展 2. 按分离机理分类 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法，称为吸附色谱法。 利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称为分配色谱法。 利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法，称为离子交换色谱法。 第一节 色谱法的分类和发展 利用某些凝胶对不同组分因分子大小不同而阻滞作用不同的差异，而进行分离的方法称为凝胶排阻色谱法。 利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白质的分离。 根据组分的电泳速度差异而达到分离的方法，称为毛细管电泳法 第一节 色谱法的分类和发展 3. 按操作形式分类 固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱。 固定相呈平板状的色谱，称为平面色谱，它又可分为薄层色谱、薄膜色谱和纸色谱。 在毛细管内进行分离的过程,称为毛细管电泳法和电色谱法。 4. 按照展开程序分类 按照展开程序的不同，可将色谱法分为洗脱法、顶替法、和迎头法。 第一节 色谱法的分类和发展 洗脱法也称冲洗法。工作时，首先将样品加到色谱柱头上，然后用吸附或溶解能力比试样组分弱得多的气体或液体作冲洗剂。由于各组分在固定相上的吸附或溶解能力不同，被冲洗剂带出的先后次序也不同，从而使组分彼此分离。这种方法能使样品的各组分获得良好的分离，色谱峰清晰。此外，除去冲洗剂后，可获得纯度较高的物质。目前，这种方法是色谱法中最常用的一种方法。 第一节 色谱法的分类和发展 第一节 色谱法的分类和发展 顶替法是将样品加到色谱柱头后，在惰性流动相中加入对固定相的吸附或溶解能力比所有试样组分强的物质为顶替剂（或直接用顶替剂作流动相），通过色谱柱，将各组分按吸附或溶解能力的强弱顺序，依次顶替出固定相。很明显，吸附或溶解能力最弱的组分最先流出，最强的最后流出。 第一节 色谱法的分类和发展 此法适于制备纯物质或浓缩分离某一组分；其缺点是经一次使用后，柱子就被样品或顶替剂饱和，必须更换柱子或除去被柱子吸附的物质后，才能再使用。 第一节 色谱法的分类和发展 顶替法的流出曲线如下图。 第一节色谱法的分类和发展 迎头法是将试样混合物连续通过色谱柱，吸附或溶解能力最弱的组分首先以纯物质的状态流出，其次则以第一组分和吸附或溶解能力较弱的第二组分混合物，以此类推。 第一节 色谱法的分类和发展 该法在分离多组分混合物时，除第一组分外，其余均非纯态，因此仅适用于从含有微量杂质的混合物中切割出一个高纯组分（组分A），而不适用于对混合物进行分离。 第一节 色谱法的分类和发展 色谱法的特点 优点：“三高”、“一快”、“一广” 高选择性——可将性质相似的组分分开 高效能——反复多次利用组分性质的差异产生很好分离效果 高灵敏度——10-11~10-13g，适于痕量分析 分析速度快——几~几十分钟完成分离一次 可 以测多种样品 应用范围广——气体，液体、固体物质 化学衍生化再色谱分离、分析 第一节 色谱法的分类和发展 缺点： 对未知物分析的定性专属性差 需要与其他分析方法联用(GC-MS,LC-MS] 第一节 色谱法的分类和发展 色谱法的历史 1903年由俄国植物学家Tsweet创立植物色素分离到现在已成为一种重要的分离、分析技术,分离混合物各组分并加以分析 第一节 色谱法的分类和发展 色谱法的发