实验细菌分离纯化小结（补充材料）.docVIP

培养基配制 用来称量酵母膏的烧杯和溶解药品的铁杯，玻璃棒记得要用蒸馏润洗。 如果没有陈海水，就用海水晶配，浓度在2~3％之间。一般我们选择2.5％（海洋微生物培养专用） 记得要在加琼脂粉之前调PH值到7.6～7.8 配2216E培养基要用“纯化琼脂粉（细菌级）” 配好培养基要及时灭菌，分装时最好用500ml锥形瓶装200ml培养基，不宜装得过多，因为该培养基容易沸腾。 分装用的锥形瓶也要预先配制。 倒平板 如果要准备大批量的平板，一定要先确定有足够的已灭菌的培养皿。 如不能及时倒，可将冷凝后的培养基再次加热化开，稍冷却后倒平板。 倒好的平板在无菌室先放一段时间让它冷凝，如果有大批量平板，最好在晚上倒平板，第二天早上再收好。这样就不会影响其他人使用无菌室。 平板不宜太干也不宜太湿。若太湿，可将平板放到无菌室，若太干，可将平板用塑料袋包住并放在阴凉处，以减少水分的蒸发。 未使用的平板最好不与已使用的平板放在一处，因为这样染菌的几率就会增大。 如果有条件，可以将平板放在培养箱里预培养1～2天，筛选掉长杂菌的平板。 涂布平板 提前灭好涂棒，无菌水。 涂布是加0.1mL 样液，再根据平板的干燥程度加无菌水或灭过菌的生理盐水，最好涂6~10圈后样液和水都能被吸收，一般加无菌水的量在100～500ul之间。所选平板最好是已预先放置了2天左右。 涂布时可预先灼烧另一根涂棒，放在一边冷却。 平板要到扣培养。 合理选择稀释度 计数 可用描点法计数，即数一个菌落，就在该菌落上点一个小圆点。 如果平板上的菌落数太多，可计数平板的一半或4分之一，再乘以相应的倍数。 转接划线 如果要挑的菌落很小，而且又长得慢，菌落全部粘到接种环上，划线时可适当增加第二梯度线的宽度和划线数，因为当菌少时，拉不开4个梯度，而第二梯度可较好的分离出单菌落。 如果要挑的菌落很大，而且又长得快，可挑菌少些，第一梯度线要多划几下，且占地要小。第二梯度线划得少且密一些，第三和第四梯度线则划得多且疏，因为这些菌主要靠第三和第四梯度线分离单菌落。第二梯度2～3条线与第一梯度线连接，第三与第二梯度线也是2～3条线连接。在第二与第三梯度划线前将接种环灼烧冷却，这样可烧死粘在接种环上的细菌。 接种环可用两个轮流划，一个在划时另一个就可以放在一边冷却。 如果平板是用来计数的，则将字写在培养皿的盖子上。 经常观察平板的长势，当菌落长的差不多时就将他从培养箱中拿出 ，防止菌落长得太快，单菌落连在了一起。 保种 培养基灭菌后要及时摆斜面。 接种环可用两个轮流划，一个在划时另一个就可以放在一边冷却。 用前要挑选斜面，长杂菌的，部分溶化了的斜面最好不要用。 挑菌时可挑多些，尽量远离菌株受污染处。开塞子后和盖塞子前都要灼烧试管口。 在试管外面贴一圈白色胶带纸，在上面写上编号和保种时间，最好还写上保种人。 培养后的斜面要及时放在6度冰箱里收藏。 记得当时间差不多时，要重新保种。