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实验八聚合酶链反应.ppt
聚合酶链反应 PCR [目的] 掌握聚合酶链反应的原理和方法 [原理] PCR技术实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。 PCR反应分3步: ①变性:通过加热使DNA双螺旋的氢键断裂，双链解离形成单链DNA， ②退火：当温度突然降低时，使引物和其互补的模板在局部形成杂交链， ⑧延伸：在DNA聚合酶和4种脱氧核糖核苷三磷酸底物及Mg 2+存在的条件下，5’→3’的聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应， 以上3步为一个循环，每一循环的产物可以作为下—个循环的模板；数小时之后，介于两个引物之间的特异性DNA片段得到了大量复制，数量可达2×106-7拷贝。 [实验步骤] 一、PCR反应体系 二、PCR反应循环设置 94℃ 4min 94℃ 30sec 55℃ 30sec 25cycles 72℃ 30sec 72℃ 5min 三、电泳鉴定 Marker: 1μl DNA染料 2μl 上样缓冲液 9μl DNA Marker 样品: 1μl DNA染料 2μl 上样缓冲液 9μl 扩增后DNA样品 电泳电压:110-120V，约30分钟 DNA Marker为D2000 实验结果观察 实验报告 一、原理 二、操作 三、结果 * * μl 25 总体积 μl 1 Taq酶 μl 2.5 buffer μl 1 dNTP μl 0.5 引物2 μl 0.5 引物1 μl 1 模板 μl 18.5 双蒸水 Tag酶：放在写着“T”字小管，每管内装10μl 模板：放在写着“模”字小管 加最后一个试剂时多吹吸几次混匀 本次实验模板在400-500bp位置 本次实验模板为大肠杆菌 位置在 400-500bp *
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