西安市慢性乙型肝炎病毒基因型检测及其临床意义.pdfVIP

· l572 · 浙江临床医学2014年10月第16卷第1O期 · 实 验 研 究 · 西安市慢性乙型肝炎病毒基因型检测及其临床意义 王海峰 付建军 赵怡生 【摘要 】 目的 明确西安市慢性乙肝患者血清~I-mV基因型的分布状况及其临床意义。方法 对262例慢性HBV患者的血 清采用巢式PCR法进行病毒基因型检测 ，并分析HBV基因型的临床意义。结果 262例慢性HBV患者的基因分型，C型186例 (70．2％)、B型58例 (22．1％)、B／c~g合型18例 (7．7％)，基因型分布在性别上差异无统计学意义，在慢性乙肝、肝硬化、 肝癌中分布差异无统计学意义，HBeAgI~性率与HBeAg阴性率差异无统计学意义。结论 西安市HBV的基因型以C型为主， 其次为B型及B、C混合型；各基因型患者的临床特点相似；HBeAg~H性率与HBeAg阴性率相比较 ，各基因型间差异有统计学 意义 (PO．05)。 【关键词】 乙型肝炎病毒 聚合酶链反应 基因型 乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirusHBV)为嗜肝 1．4 HBV基因分型 采用巢式多引物多聚酶链反应， DNA病毒，在世界范围广泛流行，严重影响人们的身 引物 由上海生工生物公司合成。外引物 ：上游引物 体健康 ，但不同地方 HBV感染情况不尽相同。我 国 序列 5’一AGCATGGGAGGTTGGTCGTC一3’，下游 目前慢性 HBV感染者大约有9300万人，其 中有大约 弓l物序歹05’一AIGCCATCAAGGCAGGATAGC一3’。 2000万人为慢性乙型肝炎患者 …1。由于不 同基因型的 内引物 ：上游引物序列5’一GGCTCAAGTTCCGGA HBV有不同的致病性 ，据 HBV全基因组核苷酸序列 ACAGT一3’。A基因型特异性下游引物 5，一CTCGCG 的异质性 ≥8％或s区核苷酸序列异质性≥4％的标准， GAGATTGACGAGATGT一3’，B基因型特异性下游 将 HBV分为9个基因型，即A—I[22．3]。HBV基因型具 弓l物 ：5’一CAGGTTGGTGAGTGACTGGAGA一3’， 有一定地理区域性分布特征 ，为了解西安 HBV基因型 C基 因型特异性下游 引物 ：5’一GGTCCTAGGAAT 分布及其可能的临床意义，本文采用巢式PCR法检测 CCTGATGrI G一3’。 西安市慢性乙肝 HBV的基因型，报告如下。 外引物扩增PCR程序参数如下 ：94cC1rain预变性， 94oClmin30s变性，59℃ lmin30s退火，72oC2rain延 1 资料和方法 伸 ，共 30个循环，72℃延长 lOmin。内引物扩增程 1．1 一般资料 262例慢性乙型肝炎患者为2012年 1 序参数如下 ：94~Clmin预变性，94~C30s变性，58℃ 至 12月在市区 (西安市中心医院感染科)或郊区 (长 30s退火，72℃30s延伸，共35个循环。NT—PCR产 安区医院、临潼区医院、阎 良区医院、蓝田县医院、 物经 15g／L(1．5％黥脂糖凝胶电泳后判断HBV基因型： 高陵县医院、户县医院)就诊的患者，且化验乙肝系 281bp为B基因型，122bp为C基因型，同时有 122bp 列阳性并经荧光PCR法检测 HBV—DNA呈阳性。其中 和281bp者为B／C混合型。 男性 175例，女性87例，年龄6～72岁，平均(34．7±18．6) 1．5 HBV—DNA定量检测 采用荧光定量PCR法，按 岁。慢性乙型肝炎的诊断按 2010年慢性乙型肝炎防治 操作说明提取HBVDNA。 指南的诊断标准 [。 1．6 统计学方法 实验结果采用SPSS18．0软件进行处 1．2 标本采集 抽取患者清晨空腹静脉血 4m]，离心