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第三章 徒手切片法 徒手切片法是指用手拿刀片徒手切片法是指用手拿刀片 （（或剃刀或剃刀）） 把新把新 鲜材料切 成薄片，徒手切片法所作的切片通 常不经染色或经简易染色后，封藏于水中即可 观察观察，但也可制成永久制片但也可制成永久制片。 优点优点 不需用切片机等贵重仪器不需用切片机等贵重仪器，有一刀片或剃刀就可有一刀片或剃刀就可 以进行切片； 制片简单制片简单、迅速迅速，能及时观察植物生活组织结构能及时观察植物生活组织结构 和颜色。 缺点缺点 微小、柔嫩、含水过多以及坚硬的材料，很难用 此法切成薄片此法切成薄片。 不经过严格的操作训练，易切成薄厚不均或不完 整的切片。 切出的片子厚于切片机切片切出的片子厚于切片机切片，，也不适合对植物子也不适合对植物子 房及胚胎等材料做连续切片。 操作步骤操作步骤 1.取材 选取待观察的植物材料选取待观察的植物材料，初步切取大约初步切取大约33cm长的小块长的小块， 再依切片的具体要求，将组织块修整为0.5cm的材料 块块。 2.切片切片 以左手夹住材料，用右手平稳地握住刀片。切片时， 使刀片与材料的断面保持平行使刀片与材料的断面保持平行，刀口自左上方斜向刀口自左上方斜向 右下方，动作要均匀有力。材料与刀片须常以水湿 润润。 切下的薄片立即用毛笔蘸水后粘取移入盛有清水的 培养培养皿内内。 胡萝卜 木髓 观察材料 剃刀 双面刀片 切片切片 33.选片选片 切片完整，在培养皿中选择薄而均匀且切面完整的 组织切片，捞在载玻片上作临时水装片，然后置于 显微镜下观察，如结构能被清晰地显示出来，则可 制成永久保存封片。 4.固定与染色 取镜检合格的切片投入取镜检合格的切片投入FAA 中固定中固定15分钟至分钟至1小时小时， 将切片移入蒸发皿或小培养皿中，依次用50%、 60%60%、70%0%各级各级浓度乙醇脱水浓度乙醇脱水，然后然后放入含放入含1%1%番番 红的70%乙醇溶液中染色30min以上。 5. 脱水 染好色的切片移入70%、80% 、90%、95% 乙醇各 级脱水5min 。滴加含1%固绿的95% 乙醇溶液染色 30s 。再换入95% 乙醇中分色，最后进入无水乙醇脱 水5min 。 6. 透明 切片移入切片移入11 ：11的无水乙醇的无水乙醇：二甲苯混合溶液二甲苯混合溶液4min4min ， 再移入纯二甲苯5min，组织切片呈透明状。镜检合 格即可封片格即可封片。 7. 封片封片 用粗口吸管将组织切片吸至载玻片上，或用解剖针 自二甲苯中将组织切片捞至载玻片上自二甲苯中将组织切片捞至载玻片上，，滴加树脂滴加树脂，， 盖上盖玻片，待其自然干燥。 注意事项 载玻片载玻片、盖玻片必须清洗干净盖玻片必须清洗干净，平放在吸水纸上平放在吸水纸上。 树胶滴加要适量树胶滴加要适量，，以盖玻片盖上时树胶刚好扩散以盖玻片盖上时树胶刚好扩散 至其边缘为宜。 树胶浓度要适当树胶浓度要适当，要既有要既有一定的粘稠度又不能过定的粘稠度又不能过 于浓，以可在盖玻片下缓缓散开为宜。 春夏季节封片时，载玻片上容易凝结水汽而肉眼 观察不出观察不出，，故需动作轻快故需动作轻快，，树胶树胶 及二甲苯不用时及二甲苯不用时 应立即盖严，不要对着切片说话、咳嗽。