淋巴细胞培养条件及常见失败原因探讨.pdfVIP

·750 · Guizhou Medical Journal ,2004 ,Vol . 28 ,No . 8 ·诊断技术 · 淋巴细胞培养条件及常见失败原因探讨 ( ) 遵义医学院附属医院肾病风湿科 563003 　刘春梅 　赵士启 　张克非 　陈忠霞 　刘 　永 　　淋巴细胞培养是实验研究常用的一项技术 ,对 1. 3 　方法 于培养器皿 ,可以选用培养板 ,培养瓶 ,培养皿 ,三角 1. 3 . 1 　标本的采取 　每一研究对象于早晨空腹采 烧瓶 ,试管 ,青 、链霉素小瓶等[ 1 ,2 ] 。目前 ,关于淋巴 静脉血 10ml , 其 中 4ml 不抗凝 , 自然凝 固 20min , 2 细胞分离方法的文献资料较多 ,论述较详细 ,而对淋 000rpm 离心 5 ～10min , 收集血清用于培养 。另 6ml 巴细胞培养则论述较少 ,较简单 。细胞培养工作十 肝素抗凝 ,用于提取淋巴细胞 。 分繁琐 ,环节较多 ,探讨细胞培养的条件 ,对于成功 1. 3 . 2 　淋巴细胞的分离与培养 　淋巴细胞的提取 培养细胞具有十分重要的意义 。本文选用 1. 5ml 离 参照文献[4 ] 并略加改进 ,将抗凝血与 D ’Hanks 液对 心管培养淋巴细胞 ,观察了淋巴细胞培养前后的变 倍稀释后用 Ficoll 密度梯度离心法提取淋巴细胞 , 化 ,探讨了淋巴细胞培养的条件及失败的常见原因。 经洗涤 2 次后 ,加入定量 D ’Hanks 液 ,混匀 ,取0 . 1ml 现报道如下 。 用血细胞自动分析仪计数 ,计算出提取的总细胞数 。 然后离心弃掉 D ’Hanks 液 ,加入一定量的 RPMI1640 1 　材料与方法 ( ) 培养液 不含双抗 ,即青霉素和链霉素 和自身血清 , ( 1. 1 　主要材料和设备 　淋巴细胞分离液 上海试剂 混匀 ,使血清终浓度为 15 %～20 % ,细胞浓度在 1 × ) ( 6 7 二厂 :RPMI 1640 培养液 Gibco ,华美生物工程公司 10 ～1 ×10 / ml 之间。取 0 . 1ml 用血细胞 自动分析 ) ( ) 进口分装 ;血清 各实验对象的自身血清 ;肝素溶 仪计数 ,淋巴细胞提取率在 80 %～95 %之间。并取 ( ) 液 250U/ m1 ,D ’—Hanks 液 ,lmol/ L 盐酸 , 56 %氢 少许用台盼蓝染色 ,记数活细胞