浓缩铀内污染对SD大鼠脑内蛋白组份的作用.pdfVIP

6 2G02，Vol22，No 中华放射医学与防护杂志2002年12月第22巷第6期Chin』旦型j!l丛型旦堕．!!!!!lber 90O05 4mol／L 005 8 4moi／L mo|lL的Trls—HCI上样于CM32层析柱Ⅱ，以台0 No．C[的pH4．0 0，迅速换含0 NaCl的pH 4 0．02mol／LPBS， mol／LNaAc洗脱可得到一个洗脱峰，之后以含0mol／LNaCI 洗脱，流速50mVh，收集洗脱峰，分别对pH7．0 000浓缩。 90005mol／L 4℃．200ird×6h×4次透析．透析液用聚乙二醇20 的pH Tris-HCl洗脱可得到另一个洗脱峰，B- 3SDS．PAGE鉴定提取物的纯度和分子量 NGF位于这一峰中。各组之间相比CM32层析柱I和Ⅱ的 具体方法见精编分子生物学实验指南”1。 交换图谱没有显著差别(图：1-2)。 4 Lowry’S法定量脑匀浆离心上清液总蛋白和8-NGF提 取物 具体方法见生物化学实验教程”1。 5Pc．12细胞突起生长试验鉴定提取物生物活性 捌 对数生长期PCI2细胞调浓度至2×106，IIll，1×106／孔加 目 S d更换 入24孔板。每孔加纯化sD大鼠p-NGF50．g／ml，每3 8 培养液，培养6d。每孔记数200个细胞，计算突起生长率， 并拍照。每组设3个复孔。每孔总液量1ml。实验另设空 白对照组，其细胞仅加RPMI1640完全培养液。 ANOVA。 实验结果的统计分析采用one-way 二、结果 时间【x5min) 1分离纯化 圈1 CM32层析柱I交换图谱 SO大鼠脑匀浆上清液上样于CM32层析柱I，以DH6．8 002mol／L PBS洗脱可得到一个洗脱峰。降解离心上清液 如 ” ¨ 掣E=Soo ¨ m ¨ o 时间(x5rain) 田2 CM32层析柱Ⅱ交换图谱 2 SDS鉴定提取物的纯度和分子量 在对照组和各实验组13NGF提取物泳道上均有一单一 2 条带，分子量约13 kD。各组脑匀浆上清液的主要组份如 下(见图3)，可见脑匀浆上清液中间两个组份的分子量范围 雪 ● 可隧2”U内污染剂量增加而加宽，30坶组还出现了条带数 蒌 目的增加。 睡 3Lowry’s法定量脑匀浆离心上清液总蛋白和8-NGF提 取物