在载玻片上制备高杂交效率的DNA芯片.pdf

第 卷第 期 暨南大学学报 （自然科学版） 22 3 VOI .22 NO . 3 年 月 （ ） 2001 6 JOurnaI Of Jinan University NaturaI Science Jun . 2001 在载玻片上制备高杂交效率的DNA 芯片 1 2 3 3 蒋笃孝 ， 宋龄瑛 ， 王德育 ， 袁春伟 （ 暨南大学化学系，广东广州 ； 广州师范学院化学系，广东广州 ； 1. 510632 2 . 510400 3 . 东南大学分子与生物分子电子学国家重点研究实验室，江苏 南京210018） ［摘 要］ 目的：改进玻璃基质上固定 的方法，提高固定 的杂交效率 方法：玻片用 DNA DNA . - ! （对、间氯甲基苯基）三氯硅乙烷和 苯基三氯硅乙烷二组分混合硅烷化试剂处理，再用 丙酮 - NaI ! 溶液处理，在表面自组装形成带有苄碘功能基的二组分混合单层硅烷膜 巯基修饰的 共价偶 . DNA 联到这一自组装的硅烷膜上. 结果：放射性分析证实玻璃基质表面共价固定DNA 的优化密度为 9 .3 X 10 - 2 mOI/ m2 ，目标DNA 杂交密度为 8 .6 X 10 - 2 mOI/ m2 ，固定DNA 的杂交率为93% . 结论：采 用两步竞争性反应的方法能够较容易地控制DNA 在芯片上的固定密度，固定的DNA 在芯片分布 较均匀，因此制得的DNA 芯片具有较高杂交效率和杂交密度，可方便地用于核酸杂交和探测研究. ［关键词］ DNA； 共价键固定； 玻璃基质； 高杂交效率 ［中图分类号］ ［文献标识码］ ［文章编号］ （ ） 0782 A 1000 - 9965 2001 03 - 0065 - 06 固定核酸的杂交已经在分子生物学、生物化学、医疗诊断、基因分析以及分子生物计算等 ［ ］ 领域得到了迅速的发展 1 ~ 5 为了将核酸杂交的应用扩大到微基因芯片等领域， 在许多 . DNA 固体基质上的固定方法仍然是必要的研究课题. 对于大多数应用来说，固定DNA 的芯片有许 多指标必需满足，除了在固体表面固定的DNA 必须是稳定的，在杂交、洗涤或分析过程中不应 发生解脱现象， 列阵表面非特异性吸附应尽量少以外，固定 的芯片的杂交效率和杂 DNA DNA 交密度应足够高以保证分析灵敏度与准确性；在探针D