X射线全身照射对免疫器官内NFkB的DNA结合活性的影响.pdfVIP

第4期 何淑杰等： X射线全身照射对免疫器官内NF一七B的DNA结合活性的影响 270 l材料和方法 1．1实验动物 健康雄性昆明小鼠，体重20士291购自白求恩医科大学实验动物部。动物随机分为假照组 和不同剂量照射组及2Gy照射后不同时间组。 1．2照射条件及实验分组 和1．omm Al。照射组给予50～200 各剂量组和各时间组动物均在5只以上。 1．3核蛋白的提取 断头处死小鼠后，立即取胸腺和脾，置o．01m01／L HEPEs．pH7．g 1．5mrrlol／LMgcl2，lommol／LKcl，10mmol／L 20mmol／L—Glycerophogphate，1rr蚰ol／LDTT，o．5mol／L PMsF，5卢g／mL Leup印tin)，冰育30111in，加入6pL10％NP一40，冰上反应2血n后，40c 所得沉淀加60皿核蛋白提取液(20rr衄ol／LHEPEs，pⅡ7．9，1．5mol／LMgcl2，o Nacl，10rrlIIl。1／L Na2M004，o．1mmol／L 1mmol／LDTT，O．5rrlIIlol／LPMsF，5pg／mLAprotillin，5pg／mL 后，13000r／min离心lomin，上液清即核蛋白，分装．一70。c保存备用。 1．4蛋白质浓度测定 采用考马斯亮兰G一250染色法．用牛血清白蛋白制作标准曲线，测量样品在595nm处的 吸光度。 1．5凝胶电泳迁移率变化分析(EMsA) 含7pg核蛋白，1皿p 确证结合的特异性。 2实验结果 2．12Gyx射线全身照射后胸腺细胞内NF．^B两种亚型的时程变化 第4期 何淑杰等： x射线垒身照射对免疫器官内NF一七B的DNA结合活性的影响 28l 2．32Gy 的活性变化 活性均略下降；而当剂量为4Gy及6Gy时， 脾细胞与胸腺细胞内NF．tB的构成及其对照射的反应存在不同的特点。 0。5 l 0 1 J 5 1 2 4 P…M 0 u％0 6Gy 1一 、’～～一一’一一_S∞Dle D50，D65 基繁謦尊繁譬篝篝篝镪 p507D5G Dose e如ctof in of Fig．3A cha“geacthity …㈨州—1…叫—1。 ．．馐栩僵馐疆且 艮日圈豳盟¨ J圈疆馐馐噩 I圜圈圈阻 J目阿置o NF—kBin 12hafterwBI splenocytes TheEMSA w船scaⅡⅡedandaII im89e alyzed F m with phosphorImager．Pro_Probe“。ne． 酣㈣ 丑虚隧屠置艇m ， sha．sham．irradiation sple m。 PrnShalh 2^4h 8h 12h2dh{8h S栅plelaM p50／埔5 p50／n50 Timecou硌eof in of {：{；±{；；； Ⅲ㈨㈣m∞∞∞。 ‰曲ⅢI_■量 同圈厦匿圈里％。噼州咖墨II-—且 目日囝圈诳置。一_曼％眠圈_II量 目虚圈圈置。㈨础m即_—_且 ㈣咖¨州目_量 偿阻圈喝耀懂…甜№姗——量 量 船妇冒叠盟 Fig．4A chang