功能性电刺激对脑梗死大鼠脑部bFGF、EGF表达与神经干细胞增殖影响的的研究.pdfVIP

一、基础研究 1、功能性电刺激对脑梗死大鼠脑部bFGF、EGF表达 和神经干细胞增殖影响的研究 向云燕铁斌庄志强金冬梅彭源 (中山大学附属第二医院康复医学科) 摘要 目的：建立“线栓法”大鼠脑梗死模型，观察FES治疗对脑梗死大鼠运 动功能(行为学)恢复的影响。同时，观察大鼠脑梗死侧组织bFGF、EGF、Nestin 的表达量，并对梗死侧SVZ和SGZ区内源性NSC数量的变化进行动态检测， 从而探讨FES治疗促进脑梗死大鼠功能恢复的可能机制。方法：清洁级成年 电脑随机数字表的方法随机分为FES治疗组、安慰刺激组和假手术组(每组各 36只)。FES治疗组、安慰刺激组大鼠以10％水合氯醛按O．4mg／kg体重剂量行 腹腔注射麻醉，以Longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型， 之后再行FES治疗电极安置手术。于术后6h采用改良的Bederson标准对大鼠进 行神经功能初步评分，选取神经功能评分为2～3分的大鼠纳入本研究。假手术 组大鼠行相同切口，但不以栓线阻断左侧MCA的血流，作为正常对照。FES治 疗组、安慰刺激组和假手术组又分为FES治疗基线组、3天组、7天组和14天 组(每组各9只)。FES治疗组大鼠于造模术后3d开始FES治疗(每天1次， 每次10min)，刺激参数为双向对称方波，频率30Hz，脉宽2509s，波升／波降为 ls／ls，强度3mA，通断比为3s：5s；安慰刺激组连接FES治疗导线，但不予电 刺激；假手术组不予特殊处理。各组大鼠手术或假手术后均分别置于普通笼内饲 养(3～4只／笼)，笼内环境和饲养条件相同。于FES治疗基线、治疗第3d，7d， 14d各时间点分别进行平衡木试验、转棒试验和网屏试验评定，随后处死取材， 通过免疫组化观察大鼠梗死侧大脑海马齿状同和室管膜下区NSC巢蛋白 (Nestin)表达阳性的细胞数目，并采用免疫印迹法(western blotting)和RT-PCR 方法检测大鼠梗死侧脑组织bFGF、EGF、Nestin的蛋白和基因表达量。结果：1．在 FES治疗基线和治疗第3d、7d时，FES治疗组和安慰刺激组网的屏试验评分差 异无统计学意义，但在FES治疗第14d时，FES治疗组大鼠的网屏试验评分优 于安慰刺激组(尸(D．仿)。在任何一时间点，FES治疗组和安慰刺激组在平衡木、 249 转棒试验评分的差异均无统计学意义(PO．05)。2．FES组火鼠梗死侧脑组织 bFGF、EGF的蛋白表达量在FES治疗第3d时已经开始增加，治疗第7d时进一 步升高，较安慰刺激组和假手术组差异有显著性意义(尸D．晒)，存治疗第14d 时mRNA表达量较第7d时略有下降，但仍高于安慰刺激组和假手术组(PD．05)。 3．FES组大鼠梗死侧腩组织bFGF、EGF的基因表达量在FES治疗第3d时已经 开始增加，治疗第7d时进一步升高，较安慰刺激组和假手术组差异有显著性意 义(Pn盯)，在治疗第14d时mRNA表达量较第7d时略有下降，但仍高于安 慰刺激组和假手术组(尸D．05)。基因表达量的变化趋势与蛋白量变化保持一致。 高，第7d时达到高峰，14d时有所下降，两组各时间点Nestin阳性细胞数均高 于假手术组，差异具有显著性意义(Pn酊)。FES治疗组第3dNestin阳性细 胞数较安慰刺激组增高，差异无显著性意义(尸n∞)，但在第7d、14d时差异 化保持一致。结论：1．FES治疗能促进脑梗死人鼠行为学的恢复。 治疗能促机大鼠梗死侧脑组织SGZ和SVZ区内源性NSC的增殖。4．FES治疗 促进脑梗死大鼠行为学恢复的机制，可能与上调梗死侧脑组织bFGF、EGF、Nestin o 水平，进而促进内源性NSC增殖，参与神经重塑有关。 2、大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑IGF．I表达的动态观察 吴红瑛范建中罗仁李川魏轶 (南方医科大学南方医院康复科) 摘要：目的观察胰岛素样生长因予(insulin-likegrowthfactor-I，IGF．1)在局 灶性脑缺血再灌注后后IGF．1的动态表达