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B.液体剪切力法细胞破碎的评价
超声波:超声波处理法
优点:
高效(~95%破碎率)
快速(若干秒到几分钟时间)
对多种生物有效
操作简便
小体积(几毫升)
存放简便(没有可拆卸部件)
缺点:
产热量大
实验室使用(无法规模化)
适合低细胞浓度
高速转盘法
优点
破碎效率高
细胞浓度适中
多种尺寸可供选择
缺点
产热
存放困难
安全问题:高速转盘
法兰西挤压机:
优点: 缺点:
易于使用 不对所有细胞有效
样品小 样品小
细胞浓度适中 实验工具
压力:高压匀浆破碎
优点:
经多次循环可达到理想效果
对多种微生物有效
细胞浓度适中
扩大性极佳:可确定的扩大参数
操作简便
连续式操作
大体积操作的能力
缺点:
需要高压
液体渗漏:高压封条
多次操作才能达到高效率
存放困难:密封装置渗漏
多次操作才能达到低细胞浓度
粘性高:DNA 释放
维修:阀门磨损
C.固体剪切力法细胞破碎的评价
研磨法:珠磨法
优点:
高破碎效率
对多种微生物有效
压力小:易于存放
细胞浓度高:泥浆浓度可达500 克/升
连续式和间歇式操作
多种尺寸可供选择
可确定的扩大参数
低维修费:没有高压密封装置,可拆卸部件少
缺点:
小珠子消耗
产品污染
零部件和服务:欧洲到美国
E.非机械法细胞破碎的评论
干燥法:
操作简单
适合大量样品:例如,酵母和蔬菜提取
需增加必要的加工步骤:细胞浓缩,去水
并非对所有细胞有效
操作结果难以预测
溶剂法:
有机溶剂:己烷,苯
有效改变细胞膜渗透性
在无细胞体系中频繁使用
溶剂的毒性
对蛋白质潜在的损坏
EPA 和 OSHA 考虑
物理法:渗透压冲击法:
概念:
盐浓度快速改变
盐的种类:NaCl,甘油,蔗糖
破碎细胞壁以释放胞内物质
优点:
操作简单
无需复杂仪器
低温操作
不影响蛋白质结构
对动物细胞和红细胞有效
缺点:
对微生物不一定有效
高盐浓度的引入和其随后的消除是必要的
冻融法
概念:
把细胞浆液冻结随后使其融化
改变细胞壁渗透性
胞内物质在融化时释放出来
优点:
细胞浆液可以盛放在无菌系统中
相对简单和方便
相对温和的方法
可以处理大量样品
缺点:
并非对所有的微生物有效
蛋白质释放率取决于生物体
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