B液体剪切力法细胞破碎的评价.pdfVIP

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B.液体剪切力法细胞破碎的评价  超声波:超声波处理法 优点:  高效(~95%破碎率)  快速(若干秒到几分钟时间)  对多种生物有效  操作简便  小体积(几毫升)  存放简便(没有可拆卸部件) 缺点:  产热量大  实验室使用(无法规模化)  适合低细胞浓度  高速转盘法 优点  破碎效率高  细胞浓度适中  多种尺寸可供选择 缺点  产热  存放困难  安全问题:高速转盘  法兰西挤压机: 优点: 缺点:  易于使用  不对所有细胞有效  样品小  样品小  细胞浓度适中  实验工具  压力:高压匀浆破碎 优点: 经多次循环可达到理想效果 对多种微生物有效 细胞浓度适中 扩大性极佳:可确定的扩大参数 操作简便 连续式操作 大体积操作的能力 缺点: 需要高压 液体渗漏:高压封条 多次操作才能达到高效率 存放困难:密封装置渗漏 多次操作才能达到低细胞浓度 粘性高:DNA 释放 维修:阀门磨损 C.固体剪切力法细胞破碎的评价 研磨法:珠磨法 优点:  高破碎效率  对多种微生物有效  压力小:易于存放  细胞浓度高:泥浆浓度可达500 克/升  连续式和间歇式操作  多种尺寸可供选择  可确定的扩大参数  低维修费:没有高压密封装置,可拆卸部件少 缺点: 小珠子消耗 产品污染 零部件和服务:欧洲到美国 E.非机械法细胞破碎的评论  干燥法:  操作简单  适合大量样品:例如,酵母和蔬菜提取 需增加必要的加工步骤:细胞浓缩,去水 并非对所有细胞有效 操作结果难以预测  溶剂法:  有机溶剂:己烷,苯  有效改变细胞膜渗透性  在无细胞体系中频繁使用 溶剂的毒性 对蛋白质潜在的损坏 EPA 和 OSHA 考虑  物理法:渗透压冲击法: 概念:  盐浓度快速改变  盐的种类:NaCl,甘油,蔗糖  破碎细胞壁以释放胞内物质 优点:  操作简单  无需复杂仪器  低温操作  不影响蛋白质结构  对动物细胞和红细胞有效 缺点: 对微生物不一定有效 高盐浓度的引入和其随后的消除是必要的  冻融法 概念:  把细胞浆液冻结随后使其融化  改变细胞壁渗透性  胞内物质在融化时释放出来 优点:  细胞浆液可以盛放在无菌系统中  相对简单和方便  相对温和的方法  可以处理大量样品 缺点: 并非对所有的微生物有效 蛋白质释放率取决于生物体

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