禽流感病毒H5、H7与H9亚型一步法多重RT-PCR检测方法的建立.pdfVIP

动物 医学进展 ，2014，36(3)：5-8 Progressin VeterinaryM edicine 禽流感病毒 H5、H7和 H9亚型一步法 多重 RT—PCR检测方法的建立 屈素洁，莫胜兰，邹联斌，胡 杰，张步娴 ，梁 媛，粟艳琼 ，施开创 ，李 军 (广西壮族 自治区动物疫病预防控制 中心，广西南宁 530001) 摘 要：为了建立能同时检测 H5、H7和 H9亚型禽流感病毒 (AIV)的方法，参考 GenBank中H5、H7 和 H9亚型 AIV 的 HA基因序列的保 守区域 ，利用Primer5．0软件设计 3对分别针对 AIV H5、H7和 H9 亚型的特异性引物 ，预期特异扩增 H5AIV 片段大小为380bp、H7AIV 为 501bp、H9AIV 为 732bp。经 过反应条件的优化 ，建立了同时检测 H5、H7和 H9亚型 AIV 的一步法 多重 RT—PCR方法。该方法特异性 强，对其他亚型 AIV 和禽呼吸道病原体检测结果为 阴性；敏感性高，H5、H7和 H9亚型 AIVRNA 的最低 检 出量分别为 1O_。、10_。、10 拷 贝／L。初步建立 了快速 、敏感 、特异地鉴别检测 H5、H7和 H9亚型禽流 感病毒 的分子生物学诊 断方法。 关键词 ：禽流感病毒；H5亚型；H7亚型；H9亚型 ；一步法多重 RT—PCR 中图分类号 ：$852．659．5；$854．43 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2015)03—0005—04 禽流感 (Avianinfluenza， AI)是 由正黏病毒科 (Orthomyxoviridae)A型流感病毒属中不同亚型病 收稿 日期 ：2014—02—19 基金项 目：广 西区水产 畜牧 兽 医局科 技项 目(桂 渔牧科 1204936) 作者简介 ：屈素洁(1982一)，女，广西南宁人 ，硕士，主要从事畜禽传染病学及分子病毒学研究。 clinMicrobiol，2004，42(5)：2054—2064． linkedimmunosorbentassay[J]．ClinVacImmunol，2009，16 [103 AmroucheT，Boutin Y ，MoroniO ，eta1． Production and (11)：1665-1674． characterization ofanti—bifid0bacteria monoclonalantibodies [12] Reyna—BelloA，CloeckaertA，VizcainoN，eta1．Evaluation andtheirapplicationinthedevelopmentofanimmuno-cuhure ofanenzyme-linkedimmunosorbentassayusingrecombinant detectionmethod[J]．JMicrobiolMeth，2006，65(1)：159—170． majorsurfaceprotein5forserologicaldiagnosisofbovineana— [11] Neiman M ，Hamsten C，SchwenkJM ，eta1．Multiplex plasmosisinVenezuela[J]．ClinDiagnLabImmunol，1998，5 screeningofsurfaceproteinsfrom Mycoplasmamyeoidessub— (2)：259—262． sp．mycoides smallcolony foran antigen cocktailenzyme— ProkaryoticExpressionandAntibodyPreparation ofSdrD SurfaceProteinOf phylococcusaureu$ Du Xin—jun，wANG Xue—lian，LIPing，GENGJie—jie，ZHANG Hong—juan，WANGShuo