ITGB4BP对创面修复中成纤维细胞的影响和其相关机制研究.pdfVIP

首届山东省急诊创伤修复与多脏器功能衰竭研讨会 ITGB4BP对创面修复中成纤维细胞的影响及其相关机制研究 吴军谭江琳彭旭彭彦孟周俊驿杨思思杨世伟 杨俊杰 张小容胡晓红陈希炜 贺伟峰 罗高兴 第三军医大学西南医院烧伤研究所；创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室： 重庆疾病蛋白质组学重点实验室；重庆器官移植基础研究所 重庆400038 摘要增生性瘢痕是皮肤真皮层受到严重创伤后的一种病理性愈合，产生的瘢痕及其挛缩不仅影响 了患者的容貌，还能导致受伤部位功能障碍，严重影响了患者的生活质量。虽然近60年来得益于治疗手 段的不断提高，大多数烧伤、创伤患者的生命得以挽救，但由于创面愈合晚期形成的增生性瘢痕的发病 机理尚未完全明了，因此无论是外科手术还是药物治疗对于增生性瘢痕仍无明显疗效。因此深入研究增 生性瘢痕形成的机制，寻找增生性瘢痕产生的相关特异性基因是目前创伤外科研究领域的热点、重点、 难点问题之一。 皮肤创伤后，创周出现缺血缺氧、炎症反应，创周微环境改变，在以TGF．Bl为主的细胞因子和机 械应力的作用下，创周静息成纤维细胞向具有收缩功能的肌成纤维细胞转化。在创面正常愈合中，肌成 纤维细胞逐渐凋亡，细胞外基质(extracellular matrix，EcM)降解，但是在增生性瘢痕愈合中肌成纤维 细胞凋亡受到抑制而持续存在，活化的成纤维细胞和肌成纤维细胞分泌大量的细胞外基质，造成胶原、 蛋白多糖、糖蛋白等过度沉积和胶原纤维排列紊乱，细胞外基质的产生和降解失衡，同时肌成纤维细胞 的a．平滑肌肌动蛋白能导致创面收缩引起功能障碍。 在前期的实验中我们对增生性瘢痕和正常皮肤内的差异表达基因进行筛选后发现，P311基因高表 Resonance 达于新生的增生性瘢痕内，随后利用酵母双杂交技术和荧光共振能量转移(Fluorescence 区发生相互作用。研究发现：一方面rrGB4BP作为真核起始因子参与调节核糖体40s和60s的结合形 成80s亚基，也能参与RNA诱导沉默复合体(RNA-induced silencingcomplex，RISC)的形成而调控 和粘附发挥调控细胞分化的作用。因此结合rrGB4BP基因特点和我们前期的实验结果，我们认为 ITGB4BP参与调节增生性瘢痕的形成，但其作用结果是什么?其具体作用机制如何?这些问题还尚待 解决。 蛋白在不同来源的成纤维细胞和不同组织中的表达差异；2)体外试验：向增生性瘢痕来源的成纤维细 胞中强制高表达rrGB4BP后，观察靶细胞在该基因作用下的功能变化及其可能的分子信号通路；3) 体内试验：观察rrGB4BP对纤维化动物模型的影响。 l、ITGB4BP低表达于增生性瘢痕来源的成纤维细胞 我们首先收集了烧伤后增生性瘢痕组织和其同体对照正常皮肤组织进行原代分离、培养获得了增生 性瘢痕来源的成纤维细胞和正常皮肤来源的成纤维细胞，然后利用Real．TimePCR技术和Western Blotting技术分别从mRNA水平和蛋白水平检测了增生性瘢痕来源的成纤维细胞和正常皮肤来源的成纤 性瘢痕来源的成纤维细胞。 第七届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议 同时鉴于胎儿的“无瘢痕愈合”情况，我们检测了孕中期19周的胎儿皮肤、正常成人皮肤和增生 并且主要分布在细胞核内，提示可能参与细胞蛋白的合成；而在正常成人皮肤和增生性瘢痕皮肤中 达，主要分布在细胞胞浆中，但在增生性瘢痕皮肤真皮层成纤维细胞中却未见明显阳性细胞的表达。 2、ITGIMBP抑制肌成纤维细胞的生物学功能 ITGB4BP强制高表达于增生性瘢痕来源的成纤维细胞后，我们利用Real．TimePCR技术和Western 1(转移生长 Blotting技术分别从mRNA水平和蛋白水平检测C1．SMA(a．平滑肌肌动蛋白)、TGF．13 Lattice，