4株鸡IBV的分离鉴定和S1基因变异性分析.pdfVIP

中国舟枚兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集 4株鸡IBV的分离鉴定及S1基因变异性分析 叶焕春1，-，李银1，魏雪涛1，黄欣梅1，刘宇卓1，张敬峰1，牛囡因1·2 (I．江苏省农科院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京210014； 2．南京农业大学动物医学院，南京210095) 近年来，虽然鸡群都普遍进行过免疫接种，但仍 染试验鸡后能复制出传染性支气管炎的典型临床症 然时常发生传染性支气管炎(IB)【lo】，给养鸡业造 状，死亡率为20％，病死鸡剖检出现典型病变。将4 成了巨大的经济损失HJ。本研究从江苏地区疑似 株初步鉴定的IB分离株命名为JSI—JS4。 IB发病鸡中分离到4株IBV毒株，研究其生物特 2．2RT-PCR扩增结果从分离毒株鸡胚尿囊液 性，将Sl基因克隆、测序、分析，目的在于探讨江苏 中提取病毒RNA，经RT-PCR扩增，获得了与预期大 省IBV分子流行病学规律和遗传变异特征。 小一致的s1基因片段，大小约为1600bp。 1材料与方法 2．3分离病毒s1基因序列比较结果4株分离 1．1材料试验动物购自乾元浩南京生物药厂 病毒间sl基因核苷酸序列同源性为79．6％～ SPF鸡场；菌种为本实验室保存；试剂均购自TaKaRa97．4％；与标准株M41S1基因核苷酸序列同源性为 公司；病料采自疑似IB发病鸡的肺脏、气管、支气 80．0％一99．7％；与疫苗株H120S1基因核苷酸序列 管、肾脏。 同源性为79．1％。99．8％。其中分离株JS3、JS4与 1．2病毒的分离及初步鉴定将疑似IB发病鸡 的病料经处理后接种SPF鸡胚，盲传3．5代，经血凝因核苷酸序列差异性很大，有大量的碱基插入与突 试验、NDV干扰试验及动物回归试验进行初步鉴 变。S1基因核苷酸序列比较树状图显示，分离株 定。 1．3病毒的RT．PCR鉴定参照GenBank发表的于一个分支；分离株JS3、JS4处于独立分支。本研 IBV S1基因核苷酸序列设计一对引物，PI：5’．CGT．究从核酸水平证明4个分离株(尤其是分离株JS3、 CATCAGGTATGGCrrGG-3’：P2：5’一ACCACCTrGAA．Js4)sl基因序列与国内外分离毒株和疫苗株存在较 GAGGACCGT-3’，引物扩增长度为1．6kb。提取病毒大差异。 RNA，进行RT-PCR扩增，以1％琼脂糖凝胶电泳分 参考文献 析扩增效果。 [1]任涛，廖明。罗开健．等．鸡传染性支气管炎病毒中国地方流 I．4S1基因克隆与序列测定PCR扩增片段经 行株的分离与鉴定[J】．畜牧兽医学报，2002，33(4)：362．365． 回收后与pMDl8．T载体连接，转化至大肠杆菌Dl-15a 【2J UuS XG．Af-ew of infeetiotm G，Kong gene4ypenephropathogenic 感受态细胞。经初步鉴定为阳性后，送上海皓嘉科 bronchitisvirus invaccinatedandnonvaeeinatedflodmin circulating 技发展有限公司测序。将获得的Sl基因核苷酸序 Chirm[J】．AvianPathoi．2004。33(3)：321—327． 列与GenBank中登录的参考毒株S1基因核苷酸序