复方鳖甲软肝方防治肺纤维化大鼠自由基损伤作用的实验的研究.pdfVIP

复方鳖甲软肝方防治肺纤维化大鼠自由基损伤作用的实验研究* 1 2 牛建昭 张东伟 付 敏 王继峰 金 焕 马梦茵 北京中医药大学细胞与生化实验室 北京 100029 摘 要 目的 研究复方鳖甲软肝方防治肺纤维化大鼠自由基损伤的作用和作用机理 方法 SD雄性大鼠 分为正常组 假手术组 模型组 强的松组 复方鳖甲软肝方高剂量组 复方鳖甲软肝方中剂量组 复方鳖甲软肝方低剂量组 每组 10只 除正常组 假手术组外其余各组大鼠气管滴注盐酸博莱霉素 正常组 假手术组大鼠气管滴注等体积的生理盐水 造模后第2天 复方鳖甲软肝方高 中 低剂量 组 强的松组分别灌服复方鳖甲软肝方 剂量分别为 1.4g/kg0.7g/kg0.35g/kg及强的松 0.56mg/kg混悬液 正常组 假手术组 模型组分别灌服等体积的生理盐水 分别测定28天时大 鼠肺组织超氧化物歧化酶 SOD谷胱甘肽过氧化物酶 GSH-Px 丙二醛 MDA和诱导型一氧化氮 合酶 iNOS的含量 同时利用Western blotting研究肺组织蛋白中 NF- B和 I B 的活性 结 果 复方鳖甲软肝方能提高大鼠体内的GSH-Px 和SOD水平 降低MDA水平和 iNOS水平 降低肺纤维 化大鼠肺组织核蛋白中NF-êB 含量 升高胞浆蛋白中IêBá 的含量 结论 复方鳖甲软肝方能调节肺 纤维化大鼠体内自由基水平 减轻自由基对肺组织结构的氧化损伤 调节肺组织蛋白I B 的活性 进而抑制NF- B活性 是该方防治肺纤维化的作用机理 关键词 肺纤维化 大鼠 复方鳖甲软肝方 自由基 核因子 B抑制剂 I B 核因子 B NF- B 外源性或细胞代谢产生的自由基是诱发细胞损伤的主要原因 生理条件下 机体内抗氧化酶系如 超氧化物岐化酶 SOD谷胱甘肽过氧化物酶 GSH-Px以及诱导型一氧化氮合酶 iNOS能及时调 节和清除自由基 肺脏发生疾病时 机体清除自由基的功能发生障碍 体内自由基增加 从而影响细 [1] [2] 胞外基质的正常重构 细胞外基质异常是肺纤维化的重要病因之一 自由基水平的异常与肺组织 [3] NF- B和 I B 的活性有关 本实验室已经研究证明 复方鳖甲软肝方具有预防和治疗肺纤维化 的作用[4-5] 为了深入地探讨其抗肺纤维化的作用机理 我们进一步研究该方对肺纤维化大鼠肺组织自 国家自然科学基金重点项目 No 教育部首批非典科技攻关项目 No.15 1 牛建昭 1945-- 女 太原市人 博士生导师 研究方向为中药抗器官纤维化 Tel : 010 E-mail: niujjzz@263.net . 2 通讯作者 Tel: 010 E-mail: wangjifengbeijin@163.com 由基产生的影响 材料与方法 1.实验材料 1.1实验药物 复方鳖甲软肝方原料粉 以下简称复方药 即复方鳖甲软肝片原料粉 由内蒙古福瑞制药有限公 司提供 批酸强的松 在本实验中为阳性对照药 广东华南制药厂生产 批号011201 注射用盐酸博莱霉素 日本化药株式会社制造 批号X12100 1.2实验动物 SD大鼠 雄性 体重206土 16g实验动物和饲料购自北京维通利华实验动物技术有限公司 实 验动物饲养在洁净级动物房 适应性喂养一周 饲料为该公司提供的固体全价饲料 饮用水为自来水 实验期间自由饮水和进食 1.3实验主要试剂 1.3.2主要化学试剂 叠氮化钠(NaN) 乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na) 乙二胺四乙酸(EDTA)十二烷基磺酸钠(SDS), 3 2 均为Sigma公司产品 5,5-二硫邻硝基苯甲酸(DTNB)四乙氧基丙烷,Fluka公司产品 硫代巴比妥 酸(TBA)上海化学试剂二厂