应用RAPD技术对中国3品系实验用小型猪进行亲缘关系分析.pdfVIP

2010广州一东莞首届国际小型猪学术论坛 应用RAPD技术对中国3品系实验用 小型猪进行亲缘关系的分析 吴丰春1，魏泓1．甘世祥2．王爱德3，曾养志· 11．第三军医大学宴验动物中心．重庆400038；2．责阳中医学院13．广西大学14．云南农业大学) 髓机扩增多态DNA(Random Amplified 生物种属鉴定，亲缘关系的妯分及多态性分析中得到广泛应用．但应用于小型猪方面的研究报 道很少．尤其是对霰国特有的实验用小型猪的研究．目前国内外尚未见报道。贵州小型譬猪、 广西巴马小型猪及西双版纳近交系小耳猪由于其近交程度高、遗传性稳定以及良好的实验应 用效果，已引起了国内外相关领域的关注。本实验应用100条随机引物对上述3品系小费猪 型猪的遗传背景和遗传标准的建立．同时对3品系小型猪闻的亲缘关系进行初步分析， l材料与方法 1．1猪的来蠢贵州小型香猪、广西巴马小型猪及西双版纳近交系小耳猪分别由贵阳中医学 院甘世样教授、广西大学王爱德教授、云南农业大学曾养志教授提供。均为利用原产地近交程 度较高的基础群．历经lO余年．进一步作封闭或近交培育而建立的品系。 取血10 Inl。加等体积2xsT(O．64mmol／L蔗糖．0．02Tris-HCl pH7．7。0．01nml／LMgCl2．2％ Triton ml x．10D)．充分混匀．冰浴15min．破碎红细胞．加5l×sr洗1-2次，每蕾加消化液 mmol／1．Tris．HCI m啪】／L mmd／L STE(10 pH8．0．0．25 EDTA，100 Naa)5rnJ和瞄、蛋白 酶K(终浓度分别为1％和0．1 mmol／ pg／mi)，按常规酚、氯仿、异戊醇抽提，乙醇沉淀，TE(t0 LTris-HCl nand／L 01-18．0，0．1 库o 品。 RAPDS 1．4引物 Kitsfor AB- 购自美国0l埘∞Technologies公司5套试剂盒：Primers 引物，共瑚条。 啦■日■：2000-04-17 基金项目-国家自然科学基金t点嘎g国家。九五。I点科技攻关夏耳(96-23-06-01)。 忭膏■介s#t车春‘19印一)．舅．谈簇．山东省寿光市．讲瘁．学士．从事动钧分子遗传学方西的研究． 247 1．5 P(TR仪美曰PE公司2400型。 2 2(10 1．6 Unml／l。， PCR反应25，1的反应体系含10×buffer5“M92’2nmd几，dNTP min．72C 5 20 min，38C退火1 引物15嘴．Ta日酶Lu．模板DNAng扩增程序为94(2变性l 40个循王f后接10mln延伸，扩增产物用含有EB(0 5％的琼脂糖凝 延伸2min 5旭^T11)的L 腔电泳．紫外灯下观察拍照． I 7