生发剂体外哺乳动物基因突变试验的研究.pdfVIP

生发剂体外哺乳动物基因突变试验研究 黄 青史 清 水 汪岱迪 陆益红 金卫红 汪玉馨 江苏省食品药品检验所，江苏南京，210008 目的：为保证化妆品使用的安全性，作为长期使用的生发类产品，其安全性研究尤为重 要。实验研究利用V79细胞，HGPRT位点正向突变实验对某品牌毛囊滋养液的诱变性进行研 究，为该产品的安全使用提供科学依据。 方法： 采用13，6.5，3.2，1.6μl/ml4个剂量组的某品牌毛囊滋养液在有或无代谢 活化条件下处理中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)3h后，经过次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT)突变基因表达和突变基因选择后计数集落形成率并计突变频率，观察其对哺乳动物 HGPRT基因位点的影响。 结果：某品牌毛囊滋养液在加和不加S9的条件下，各浓度组突变体频率(mutant frequeney:MF)与对照组相比均未达到MF≥3SMF的标准，也无剂量反应关系。 结论：在本试验条件下，某品牌毛囊滋养液无致突变作用。 关键词： 遗传毒性；基因突变；生发剂 ThestudyofthemutagenicityonV79cellsinducedbypilatory HUANGQingSHIQing-shuiWANGDai-diLUYi-hongJINWei-hong WANGYu-xing JiangsuInstituteforFoodandDrugControl,Nanjing210008, China AbstractObjective:Tostudythegenotoxieityeffectsofpilatoryonthechromosomesofmammaliancells. Methods:V79cellswereincubatedwithpilatoryattheconcentrationof13,6.5,3.2,1.6μl/ml.Thecellswere observedforthemutationsofHGPRTphenotypicexpression, theproportionsofcellcloneandmutantclone generation.Results:Inthepresenceandabsenceofthemetabolicsystem, therewasnosignificantdifference infrequencyoftheV79HGPRTgenemutation.Conclusion:Astheresultwasnegative, pilatoryhasno mutagenicityinthiscondition. Keywords:Genotoxicity;Genemutation;pilatory 以ANGSUPHARMACoLoGICALSOCIETY 江苏省药理学会青年工作委l皎会成立大会甏药理学科青年科技创新学术研讨会 1材料和方法 1．1受试物：某品牌毛囊滋养液，棕色液体，由75％乙醇配制，批号规格：120Illl／瓶／盒。 嘌呤(6一TG)、胸苷、次黄嘌呤、氨甲喋呤、甘氨酸均购自Sjgma公司。 制备。 养液，补以20％d、牛血清及适量抗菌素(青霉素，链霉素)。试验前，接种于含次黄嘌呤及胸腺嘧啶，氨 甲喋呤，甘氨酸的MEM培养液中培养1周，先将野生型细胞群体中存在的自发HGPRT座位突变体选择性杀 灭。 1．5试验方法 1．5．1V79细胞细胞毒性测定：将5X10。个细胞接种于直径为100mm甲皿巾，共种6im，于37c5％二氧化 碳培养箱中培养24h。设溶剂对照组(75％乙醇，给药量13la1／m1)；阳性对照组(-$9：EIdS，给药量5ul／ 11 液组4个剂量组(以75％乙醇为稀释溶剂，给药量13 与细胞作用3h，结束后吸去含受试物的培养液，用PBS洗细胞两次，换入含20％血清的培养液，继续培养 组的集落形成率表示细胞毒性。 相对集落形成率=样品组集落数／对照组集落数 1．5．2突变型细胞的表达：按毒性实验接种细胞和加样品处理，培养结束后，用胰酶一EDTA消化，待细胞 培养3d。 1．5．3突变体的选择及集落形成率的测定：表达结束后，消化细胞，分别接种，每组8个平皿，每平皿 接种lXl06个细胞，待细胞贴