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生防细菌发酵液对寄生曲霉菌丝生长与产毒的影响· 闰培生 哈尔滨工业大学(威海)海洋学院， 山东省威海市文化西路2号，邮编264209 摘要：本文研究了不同发酵条件下生防细菌产生的生物活性物质对寄生曲霉菌丝生长和产 毒的抑制作用，结果表明，B5菌株液体培养2-4D后，在发酵上清液中产生了大量的、可显 著抑制寄生曲霉菌丝生长和黄曲霉毒素合成的生物活性物质；在10-20。C温度范围内B5菌 株产生的活性物质量很少，而在30一37 oc温度范围内可产生大量的活性物质；与静止培养相 比，振荡培养可显著促进活性物质的产生。研究结果为我们开发高效多功能安全的微生物农 药提供了可能。 关键词：黄曲霉毒素，生物防治，细菌，生物活性物质 黄曲霉毒素是自然界发现的毒性最强的真菌毒素，具有致癌性、致畸形性、 诱变性、免疫抑制性和急性毒性，主要包括黄曲霉毒素Bl，B2，G1，G2。已有 研究表明，黄曲霉毒素可在作物收获前和储藏期间广泛污染农产品，并继而污染 工业产品和畜产品，已在玉米、花生、棉籽、禾谷类粮食、小麦和黑麦面包、发 酵饮料、牛奶、干酪、肉类、果汁、干果类等许多工农业产品中检测出黄曲霉毒 素，这不仅会导致工农业经济的严重损失，而且会对人类和动物健康造成极大危 害n嘲。因此，开展有效地防止黄曲霉毒素污染食品是一个亟待解决的重大课题， 具有十分重要的理论和现实意义。为此我们利用寄生曲霉NA突变株为指示生物， ，／ 从土壤中筛选出能抑制黄曲霉毒素生物合成途径中第一个稳定且呈橘红色的中 间产物Norsolorinicacid(NA)积累的生防细菌新菌株b1，初步研究表明这些 生防细菌新菌株对NA的抑制作用是由于产生能分泌到培养基中的生物活性物 质，本文对其中的一株生防细菌菌株B5在不同发酵条件下产生的生物活性物质 对寄生曲霉菌丝生长和黄曲霉毒素合成的抑制作用进行了初步研究，以期为开发 ’ 有效抑制黄曲霉毒素污染的微生物药物提供科学依据。 ，， ·注：本研究为国家自然科学基金、教育部留学回国人员科研启动基金和山 东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助项目。E—mail：psyan6@hotmail．corn -155- 1．材料与方法 1．1供试微生物菌株及其孢子或菌体悬浮液的制备 寄生曲霉SYS：4菌株为一产毒菌株，可产生黄曲霉毒素Bl，B2，Gl，G2，将 该菌株于28。C温度下培养于GY斜面，直至产生孢子后，向斜面中加入适量的无 菌生理盐水，小心刮取孢子，经过滤后，获得孢子悬浮液，于低温下保藏备用。 细菌B5菌株为本室分离之山东省土壤中的能抑制NA产生及多种植物病原真菌 生长的生防细菌新菌株，常规条件下保藏备用。 1．2发酵条件 1．2．1培养时间。取过夜培养的B5菌株培养液，按1％的接种量接种于盛有 20mlGY培养液的lOOml三角瓶中，于37。C和150 rpm下分别培养l、2、3和4 天后，将培养液于8000rpm下离心20分钟，收集上清液，备用。 下培养4天后，按上述方法收集上清液，备用。 1．2．3通气条件将接种B5菌株的GY培养液分别在150rpm和静止条件下于 37。C分别培养4天，收集上清液，备用。 1．3上清液的处理 将上述上清液的pH值分别调整至对照培养液的pH值，并补充与对照培养液 配方等量的营养物质，由此获得的上清液用于培养寄生曲霉SYS一4菌株，以测定 发酵液中的活性物质对寄生曲霉菌丝生长和产毒的影响。 1．4寄生曲霉的培养、生长与毒素测定 ’。 利用微量培养法研究B5菌株发酵上清液中的活性物质对寄生曲霉SYS一4菌 株菌丝生长和黄曲霉毒素产生的影响n1，即取经过1