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评价HFRS疫苗效果的攻击毒株的选择 姚苹苹，徐芳，朱函坪，翁景清，朱智勇 ‘肾综合征出血热(HFRS)是一种严重危害人体健康的自然疫源性疾病。我国占全球发病总数的90％， 病死率约为3％。10％，波及全国30个省市和自治区。在各种预防HFRS的措施中，疫苗是一种最特 异和最有效的预防手段。迄今为止，本实验室已经研究出HFRSI型、Ⅱ型和双价沙鼠肾灭活疫苗，并 已取得正式生产文号，为预防HFRS起到了重要的作用”乇1。而HFRS疫苗质量的好坏，对HFRS疫区 的防病效果起很大的影响。考核HFRS疫苗免疫效果最常用的方法是中和抗体效价的检测，但家兔经 疫苗免疫后活毒攻击，检查家兔小肠的病毒抗原是考核疫苗免疫效果最直接、方便、稳定的方法。本 课题组从200 1—2002年HFRS毒株浙江分离株中筛选出一株攻击家兔后小肠荧光抗原最强的ZJ4株作 为今后考核HFRS疫苗效果的攻击毒株。 材料和方法 获的野外鼠鼠肺标本中分离的9株HFRS病毒株中筛选得到【3。1，毒株在乳小白鼠脑内传5～8代，取鼠 目前HFRS沙鼠肾细胞灭活疫苗的毒株。以上毒株型别经单克隆荧光抗体鉴定。 1．2动物：出生20d左右的沙鼠和2～5Et龄的乳沙鼠系本实验室饲养；家兔为浙江省药品检定所 提供，白毛，体重2～3kg，雌雄不限。 1．3试剂：HFRS荧光血清抗体和兔抗HFRS IgG致敏血球为本室自制，新鲜鹅 血球由浙江省天元生物药业股份有限公司提供。 1．4 细胞，培养后按生物制品规程要求中肾综合征出血热疫苗生产的方法研制疫苗睁’，最后以1：4000B一丙 内脂灭活，制成的疫苗灭活前感染滴度为6．75Lg 原为1：128。 药业股份有限公司生产的HFRS沙鼠肾双价灭活疫苗，经安全试验合格后(Vero—E6细胞盲传3代阴性)， 用于免疫家兔，接种程序为od、7d各1针，每针肌内接种1ml。家兔首针免疫后28d肌内注射HFRS 活病毒，10一稀释度1m1]只，lOd后杀兔取脾、肠做冰冻切片，按直接荧光法检查病毒抗原。阴性者为 有保护抗原作用，反之无保护。每批均设2只未免疫的正常家兔作为阳性对照。 基金项目：浙汀省自然科学基金资助项目(项目号：300493) 作者单位：浙江省疾病预防控制中心病毒研究所浙江省肾综合征出血热重点实验室 杭州310009 --——522—— 1．6抗原检查：攻击lOd后，血管注射空气将家兔致死，取脾脏、小肠冰冻切片，按直接荧光力‘ 法榆查抗原。 2结果 脏、小肠均检查不到病毒抗原。对照组未经疫苗免疫的12只家兔活毒攻击后，4株新分离毒株家兔的 脾脏、小肠均检查到病毒抗原，而且ZJ4株家兔小肠的病毒抗原的荧光最强；ZIO、Z5株家兔的脾脏、 小肠检查不到病毒抗原。见表1 享 至 zJ4 zJ5 zJ7 Z5 Z10 3讨论 本实验室朱智勇教授于20世纪80年代初通过动物实验在国内外首次证明了家兔是HFRS病毒的 疫苗质量好坏的最重要指标是效力试验中和抗体的效价，中国生物制品规程中明确指定HFRS灭活疫 苗效力试验的动物采用家兔。因此，本研究的实验动物采用家兔也是非常合理的。 评价HFRS疫苗免疫效果的重要指标一中和抗体的滴度，本实验室也在开展这项工作，包括利用 空斑和酶斑的方法检测疫苗免疫血清中和抗体滴度的高低，但根据我们的经验，这些方法不够稳定， 特别是空斑法必须控制好很多实验条件，否则的话就得不到理想的实验结果。而本研究的方法稳定、 直接、简便，在研究HFRS疫苗的实验室里建立这项方法非常重要。本实验室的HFRS疫苗株和原先 研究用的毒株均系80年代分离得到，随着时间的推移和病毒的变异，目前，本实验室的老毒株无法用 于攻击试验，本实验证明80年代浙江分离株ZIO和z5毒株攻击家兔后小肠、脾脏均检查不到病毒抗 原，而4株浙江新分离株攻击家兔后脾脏、小肠均能检查到病毒抗原，以ZJ4株攻击的家兔小肠荧光 抗原最强。因此，我们将ZJ4株作为今后考核HFRS疫苗效果的攻击毒株。 【参考文献】 [2】张遵保，张永振，刘文雪，等．双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗基础免疫两针后的预防效果．中华流行病 学杂志，2002，23：76．77． 【3】姚苹苹，朱智勇，赵芝雅，等．肾综合征出血