利用PCR-DGGE技术筛选分离海南黄帝椒产品微生物.pdfVIP

FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES 利用 PCR．DGGE技术筛选分离海南黄帝椒产品微生物 李汉文，诸葛斌 ，方慧英，孙进 ，龚星慧，诸葛健 1(江南大学工业生物技术教育部重点实验室 ，江苏 无锡 ，214122) 2(江南大学食 品科学与技术 国家重点实验室，江苏 无锡 ，214122) 3(江南大学生物工程学院工业微生物研究中心，江苏 无锡 ，214122)4(浙江正味食 品有限公司，浙江 义乌 ，322000) 摘 要 黄帝椒是海南特产高辣度辣椒 。该研究以黄帝椒产 品为原料 ，采用聚合酶链式反应一变性梯度凝胶 电 泳 (PCR—DGGE)技术分析 了其微生物种群关系，并结合传 统平板筛选法进行菌种分离及鉴定 ，获得 了海南特辣 黄帝椒产品优势微生物。研究结果显示，海南黄帝椒产 品平板筛选分离到 了Pseudomonasstutzeri，Lactobacillus plantarum，LactobaciUusbrevis等可培养 的菌株 ；DGGE图谱 中检测到 了6个条带，其 中，乳酸菌 占总菌数 的65％， 处于最优势地位 ，假单胞菌 占总菌数 的16％，处于次要地位 。该研 究也首次提及 了不 同的微生物对黄帝椒产 品 的颜色、脆性 的影 响。 关键词 黄帝椒 ，PCR，DGGE，微生物 辣椒是我国重要的蔬菜作物之一 ，有广泛的种植 环境微生物的研究 。PCR-DGGE的具体过程是提取 面积和消费人群。我国辣椒种植面积达 133万 hm ， 环境中的总微生物 DNA，并 以混合 DNA为模板扩增 年总产量达 2800万 t，经济总产值达 700亿元 ，居蔬 16SrDNA上的一段可变 区，扩增得到 的产物通过变 菜之首 I2。辣椒营养丰富 ，富含 V ，V ，果胶 ，蛋白 性梯度凝胶电泳分离后测序 比对。此技术结果准确、 质 ，钙铁磷矿质元素。同时也具备多种生理功能：辣 简单易行。迄今为止 ，PCR-DGGE已被广泛用于食 品 椒食用后能促进 胃液分泌 ，调节 胃口，增强食欲 ；刺激 微生态 的研究 ，如奶酪 、腊肠 、香醋 等 。本 心脏 ，加快其跳动 ，促进血液循环 ，活血助暖；适当多 实验采用传统的微生物分离技术和 PCR—DGGE技术 吃些辣椒 ，不仅能降低造成动脉硬化 的胆固醇含量 ， 相结合 的手段对发酵成熟后的高辣度黄帝椒进行 了 而且能预防风湿性关节炎、风湿热 、神经痛 以及冻疮 微生物的分离、鉴定 ，分析 了高辣度黄帝椒发酵 的微 等病症 ；辣椒还能加速脂肪分解抑制肥胖、美容肌肤 生物种类及其含量和相应功能的关系，为进一步研究 等。发酵素辣椒产品不但风味独特而且营养更丰富， 黄帝椒产品色泽 、脆性的稳定性提供基础。 市场前景好。目前我国市面上 的发酵辣椒产 品主要 1 材料和方法 以中辣或低辣的红辣椒为主 。 黄帝椒 (学名 ：中华辣椒 Capsicumchinense)是海 1．1 样 品采集及预处理 南特产的高辣度黄色辣椒 。相 比于其他辣椒 ，黄帝椒 采集海南特产黄帝椒腌制成熟 1个月的产品，于 不但辣味更甚 、色泽 明黄 ，营养物质尤其是 V 、果胶 无菌条件下分装至棕色瓶 中，4c=【保存备用。取样 品 和钙铁矿质元素等的含量更丰富，更适合作为高档辣 适量 ，加 30mL0．1mol／L的pH6．8的磷酸盐缓冲液 椒食品和调味料的原料 。目前黄帝椒的腌制主要是 和玻璃珠数颗，200r／min摇床打散均匀。用灭菌的 采用传统 的自然腌制方法 ，其 中微生物种类及其作用 双层纱布过滤 ，滤渣用0．1mol／L的磷酸缓冲液冲洗 尚不完全清楚 ，产品在制作过程 中易出现褐变、变味 2～3次，收集全部滤液。滤液再用灭菌 的双层擦镜 等不稳定现象 。自从 Muyzer 将 PCR—DGGE