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显微注射仪及成像分析系统 产地:日本Nikon公司 型号:PLI-188 注射压力:0.2-60psi DXM1200F 1200万像素 2/3-in. CCD High density 图像分析软件SimplePCI 基因枪 产地:美国Bio-Rad公司 型号:PDS-1000/He 可裂圆片压力:450psi,900psi,1100psi,1300psi,1550psi,1800psi 金粉:0.6um,1.0um,1.6um * * * * * * * * * * * * * * * * 扫描电镜 ?原理与应用: ?电子“探针”扫描,激发样品表面放出二次电子,探测器收集二次电子成象。 ? CO 2临界点干燥法防止引起样品变形的表面张 力问题 三 扫描隧道显微镜scanning tunneling microscope,STM 原理:根据隧道效应设计,当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时,此处电子云重叠,外加一电压(2mV~2V),针尖与样品之间形成隧道电流。电流强度与针尖和样品间的距离有函数关系,将扫描过程中电流的变化转换为图像,即可显示出原子水平的凹凸形态。 三、 扫描隧道显微镜 ?Scanning Probe Microscope,SPM 80年代发展起来的检测样品微观结构的仪器, 包括:STM、AFM、磁力显微镜、摩擦力显微镜等。 反映出样品表面形貌信息、电特性或磁特性等。 ?分辨率: 侧分辨率:0.1~0.2nm, 纵分辨率:0.001nm ?用途:纳米生物学研究领域中的重要工具,在原子水平上揭示样本表面的结构,观察生物大分子、膜、病毒等的结构。 三态(固态、液态和气态)物质均可进行观察 第二节 细胞组分的分析方法 1 离心用超速离心技术分离细胞器与生物大分子及其复合物 2 细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 3 特异蛋白抗原序列的定位与定性 4 细胞内特异核酸的定位与定性 5 放射自显影技术 6 定量细胞化学分析技术 一、 离心分离技术 ?用途:于分离细胞器与生物大分子及其复合物 ?差速离心:分离密度不同的细胞组分 ?密度梯度离心:精细组分或生物大分子的分离 差速离心 Differential centrifugation 特点: 介质密度均一; 速度由低向高,逐级离心。 用途:分离大小相差悬殊的细胞和细胞器。 沉降顺序:核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体。 可将细胞器初步分离,常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 密度梯度离心 用介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部,通过离心力场的作用使细胞和细胞成分分层、分离。 类型:速度沉降、等密度沉降。 常用介质:氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。 分离活细胞的介质要求: 1)能产生密度梯度,且密度高时,粘度不高; 2)PH中性或易调为中性; 3)浓度大时渗透压不大; 4)对细胞无毒。 密度梯度离心: 1 连续密度梯度 不连续密度梯度 常用的介质: 蔗糖、氯化铯、甘油等。 AKTA快速蛋白纯化系统 产地:瑞典安玛西亚公司 型号:AKTA purifier 10 流速:0.001–10 ml/min 压力:0–25 MPa 检测:215,254,289nm pH 范围: 2–12 温度范围:4 °C–40 °C 二、 细胞内核酸、蛋白质、 酶、糖与脂类等的显示方法 ?原理:利用一些显色剂与所检测物质中一些 特殊基团特异性结合的特征,通过显 色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来 判断某种物质在细胞中的分布和含量。 Feulgen Staining (DNA);Millon 染色(蛋白); 苏丹染色(脂类);PAS反应(多糖);Gomori 方法(碱性磷酸酶)等。 三、特异蛋白抗原的定位与定性 ?免疫荧光技术 快速、灵敏、有特异性,但其分辨率有限 ?免疫电镜技术: ?免疫铁蛋白技术 ?免疫酶标技术 ?免疫胶体金技术 应用:能对蛋白进行精细定位。如通过对分泌蛋白的定位,可以确定某种蛋白的分泌动态;胞内酶的研究;膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等。 ?蛋白电泳(SDS)与免疫印迹反应(Western-Blot) 四、细胞内特异核酸的定位与定性 ?光镜水平的原位杂交技术 (同位素标记或荧光素标记的探针) ?电镜水平的原位杂交技术 (生物素标记的探针与抗生物素抗体相连的胶体金标记结合) ?PCR技术 PCR 技术 PCR即
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