小鼠-Vero细胞测定白喉类毒素抗体方法试验条件优化地研究.pdfVIP

第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 实验动物 4．2 根据药敏试验结果，改用卡那霉素对病兔进行治疗，同时注射高免血清，对兔群进行疫防 接种，有效地防止疫病的蔓延和减少了死亡。 5 结论与讨论 5．1 该兔场暴发的以家兔急性死亡，急性腹泻为主要特征的传染病，通过流行病学调查、临床 症状、病理剖检、实验室诊断及药物治疗，证实为兔魏氏梭菌病。 5．2 本次发病的原因主要由于饲料中草粉质量突然发生改变引起的，查明原因后，立即更换草 粉。由此可见，要保证家兔的正常生产，平时除了要加强饲养管理，搞好环境卫生，少喂高蛋白 饲料，兔舍内避免拥挤，注意灭鼠灭蝇外；还必须严把饲料原料关，为此应选择一些有实力，信 誉良好的原料供应商，尽量保证每一批次原料品质基本一致。另外，每批原料入库前均应抽检， 发现问题，应及时做出调整。 5．3 药敏试验结果提示，临床使用抗生素药物防治疫病时，应将药敏试验结果与临床疗效结合 起来，选择特效药，以防滥用抗生素造成不良后果。 5．4 疫苗在保存和使用过程中，一定要严格按说明书的要求和制定的免疫程序进行免疫，才能 确保疫病能得到有效的预防。 参考文献： [1]万遂如．主编．兔病防治手册．北京．金盾出版社，1997．40-42． [2]甘肃农业大学．主编．兽医微生物学．北京．农业出版社．1988．240—242． [3]管远志，王艾琳等．主编．医学微生物学实验技术．化学工业出版社．北京．2006．101-136． [4]孔繁瑶．主编．家畜寄生虫学．北京．农业出版社，1981．448—450． [5]杜念兴．主编．兽医免疫学．上海．上海科学技术出版社．1985．183—193． 小鼠-Vero细胞测定白喉类毒素抗体方法试验条件 优化的研究 杨邦玲，刘 琦，黄佐林，季薇萍 (武汉生物制品研究所，430060) 【摘要l目的优化小鼠叫ero细胞测定自喉类毒索抗体方法的试验条件。方法用含白喉类毒素的制品免 疫Nil{小鼠，35天后眼眶采血，分离血清，于96孔板对小鼠-vero细胞测定白喉类毒素抗体方法的试验条件进 行筛选。结果确定了小鼠-vero细胞测定白喉类毒素抗体方法的最佳试验条件。结论优化试验条件的小鼠一vero 细胞测定白喉类毒素抗体方法，能客观准确地评价白喉类毒素免疫保护效力，具有特异、灵敏、重复性好的特点。 【关键词l白喉类毒素；抗体；Vero细胞 白喉类毒素抗体测定是评价含白喉类毒素的制品免疫保护性效力的指标，曾采用的方法是豚 鼠保护性试验，该方法只能定性，不能定量汜’。80年代WHO首推豚鼠免疫攻击法(此即为经典方 法)，这种方法虽然客观、特异，但由于操作繁琐、豚鼠用量大、成本高，故未用于制品常规检 定而纳入2000年版中国生物制品规程。随着行业的发展，生物制品进入国际市场，为了便于国 246 实验动物 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 际交流，需要有一个客观、公正的质量评价标准，WHO于90年代初推荐了小鼠一Vero细胞测定白 喉类毒素抗体法，此方法已纳入2000年版《中国生物制品规程》。但由于该方法影响试验结果的 因素较多，要么灵敏性差，要么稳定性不好。为此，笔者曾对该方法的试验条件进行优化研究， 结果证实，优化试验条件的小鼠vero细胞测定白喉类毒素抗体方法，不仅具有特异、灵敏、重 复性好等特点，而且能客观评价白喉类毒素制品的免疫保护性效力。现将研究结果作--4,结。 1 材料与方法 1．1 主要试剂 1．1．1 吸附白喉类毒素国家参考品(001。，102IO／安瓶)，购自中检所。 1．1．2 白喉抗毒素国家标准品(004。，9．5IU／m1)，购自中检所。 1．1．3 白喉试验毒素(200201001，480MLD／m1)，本所菌苗室提供。 1．1．4 供试品(吸附白喉疫苗、吸附白破联合疫苗、吸附百白破联合疫苗、吸附无细胞百白破 联合疫苗、吸附百白破乙肝联合疫苗)，本所出品。 1．1．5 白喉类毒素(200106004，1260Lf／m1)，本所菌苗室提供。 1．1．6 实验动物(NIH小鼠，lO-129／只，同一性别)，本所实验动物中心提供。 1．2 方法 1．2．1 Vero细胞悬液工作浓度的确定 将vero细胞培养于细胞瓶中，待单层细胞长满80-