农杆菌介导的Bt基因crylAh转化结球甘蓝研究.pdfVIP

Ah转化结球甘蓝的研究 农杆菌介导的B芒基因cryl 崔 磊 杨丽梅。 方智远 刘玉梅庄 木张扬勇 孙培田 (中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京100081) E蔼以结球甘蓝(Brassicn。leracPn 根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法将苏云金芽孢杆菌(Bacillus 因在蛋白质水平有了表达。离体叶片抗虫实验表明，部分转基因植株对延缓目标害虫的生长有显著作用。 根癌农杆菌 Bt基因结球甘蓝 匿圆 crylAh olerecea 甘蓝(Brassica 蓝的生产中，病虫害的发生相当严重，严重地影响了甘蓝的产量和品质。其中为害严重的害虫主要是 鳞翅目的小菜蛾和菜粉蝶。近年来，随着各种杀虫剂的大量使用，小菜蛾和菜粉蝶都已经不可避免地 et et et 对化学杀虫剂产生了抗药性(Talekaral，1993；Tabashnikal，1994；Tabashnikal，1997)； 随后兴起的生物农药，虽然比较环保、高效，但是受环境影响大、成本高。其中，Bt生物制剂是一种 剂和转基冈作物产生了一定的抗性。因此开发新型抗虫基因，构建双价或多价基因，拓宽植物抗虫资 源以延缓目标害虫抗性的产生，已成为育种家和科研人员的一个重要课题。 et 进行了转化研究(Chantal et et 转化植株(Berthomieu al，1995)；Cao et Jun B￡基因导入花椰菜中，获得转基因愈伤组织，但没有植株水平上的检测(华学军等，1992)；毛慧珠等 因研究中，所使用的材料多为杂交种。 虽然以农杆菌介导转化甘蓝已经取得了部分成功，但到目前为止，甘蓝的遗传转化效率都比较低， et et 而且不同的基因型之间也存在较大差异(Tabashnikal，1997；Puddephatal，1996)。因此，甘蓝 的转基因研究一直被视为是较难转化的。 本课题组拥有丰富的甘蓝种质资源和雄厚的育种基础，此试验中使用两份甘蓝材料都为纯合的优 良自交系，通过农杆菌介导法将新型＆抗虫基因crylAh导人其中，将为甘蓝抗虫育种创造优良的种 质材料奠定了基础。 -通讯作者 基金项目：围家自然科学基金；国家863计划项目(2008AAloZl55) 328 器吕口生物技术农杆菌介导的Bt基因crylAh转化结球甘蓝的研究 1材料与方法 ， 1．1材料 1．1．1植物材料 供试材料：两份甘蓝自交系，材料编号分别为A和B，由中国农业科学院蔬菜花卉研究所甘蓝组 rain，无菌水冲洗3--5 提供。甘蓝种子在75％乙醇中浸泡2rain后，在14％的次氯酸钠溶液中灭菌14 次，置于PM(MS+6-BA1mg／L+NAA h，暗培养8hi。播种4--一5d后，取甘蓝幼苗具柄子叶及下胚轴作 25ttmol·m_2·s～，每日光培养16 为转化的外植体。 1．1．2菌株和质粒 供试根癌农杆菌(Agrobacterium NPTⅡ选择标记基因和GUS标记基因。 1．2方法 1．2．1 茵液准备 0．4mmol／L。 1．2．2转化程序 cm的下胚轴，接种在PM培养基上，预培养48h，温度(25 切取无菌苗上的具柄子叶和0．5～o．8 ±1)℃，光照强度25“tool·tel-2·s一，每日光照16h，暗培养8h；然后将其浸入经