Brazzein基因的合成及pGAPZαA-Bra表达载体的构建.pdfVIP

维普资讯 安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2008，36(15)：6230—6232 责任编辑 孙红忠 责任校对 马君叶 Brazzein基因的合成及 pGAPZctA．Bra表达载体的构建 王长远 ，张丽萍 ，刘松财2*，汤丹2 (1．黑龙江八一农垦大学，黑龙江大庆 163319；2．吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春 130062) 摘要 [目的]为Brazzein基因在酵母 SMDl168中转化和表达奠定基础。[方法]利用重叠延伸PCR(SOE—PCR)合成 Brazzein基因，将其连 接到pMD18一T载体上，构建克隆载体pMD18一T-Bra。分别用XhoI和 I限制内切酶对克隆质粒pMD18一T-Bra和酵母表达载体pGAPZ~ 进行酶切 ，并在BDNA连接酶作用下，将回收的目的基 因连接到pGAPZ~ 载体上，构建重组质粒pGAPZaA-Bra。[结果]通过PCR扩增获 得了约 188bD的Brazzein类似物的编码序列，将其克隆到pMD18一T质粒 ，用XhoI和 0I双酶切后，连接到pGAVZ~ 载体，成功构建 了 重组表达载体 pGAW~ -Bra。Brazzein基因其中各碱基未发生突变，整个表达载体 阅读框正确无误。[结论]利用基 因工程的方法生产 Brazzein是可行的。 关键词 Brazzein；克隆；pGnW_~-Bra表达载体 中图分类号 Q782 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2008)15—06230—03 SynthesisofBrazzeinGeneandConstructionofExpressionVectorpG~ -Bra WANG Chang-yuanetal (HeilongjiangAugustFirstIandReclamationuni、 ，Daqing，Heilongjiang163319) Abstract O『bjcetivelqfheresearchahnedtolavthefoundationforthetrnasformationandexpressionofBrazzeingeneinyeastSMD1168．1MethodJ Brazzeingenewassynhtesizedbyl】sIr splicingovedapextensionPCR (S0E—PCR)．Itwas conncetedwihtpMD18一Tvectortocons~uetcloningvcetor pMD18一 Bm．Enzymedigestionwiht restrictionendonucleaes Xho InadXba 1was madeoncloningvectorpMD18一T-Branadyeastexpressionvcetor pGAPZ~ ．UnderhteactionofT4DNAligase，htereclaimedtargetgenewasconncetdewihtp( vcetortocons~uctplasmidpGAPZaA-Bra．1Re— suitiA codingSequenceofBrazzeinmlalogwiht htesizeofabout188bpwasobtainedthroughPCRmnplification．Afteritwas clonde pMD18一Tplasmld naddigestedwiht doubleenzymesXhoInadXbaI．itwasconnectde wihtpGAPZ~ vcetor AndhterecombinnatexpressionvcetorpGAPZaA Binwas successfullyconstructed NomutationwasfoundineachbaseinBrazzeingenenadhtereadingframeinhtewholeexpressionvectorwasexact 1Conclu— sion]ItwasfeasibletoproduceBrazzeinbyhtemehtod ofgeneticengineering Keywords Brazzein；Cloning；ExpressionvectorpGAPZaA-Bra Brazzein是 1994年Ming等从非洲西部野生植物果实中 蛋白胨 (Peptone)、酵母提取物 (Yeastextract